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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PRMT5酶活性抑制劑(EPZ015666)
貨號(hào) | FS-X10485 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:EPZ015666 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg EPZ015666是一種有效的PRMT5酶活性抑制劑,IC50為22nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1616391-65-1 純度:98.56% 分子量:383.44 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:EPZ015666
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10485
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中國(guó)克魯維酵母淋巴管內(nèi)皮和血管內(nèi)皮受體1抗體Anti-Ferritin Antibody血栓烷受體(TP)
露濕漆斑菌鞭毛蛋白2抗體Anti-FES Antibody血栓A2(TXA2)
硬結(jié)節(jié)桿菌跨膜蛋白SEMA5A抗體Anti-FFAR1 Antibody血色病蛋白(HFE)
香菇IQCJ抗體Anti-FGA Antibody血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)
糞腸球菌*SH2結(jié)構(gòu)域蛋白C3抗體Anti-FGA Antibody血清淀粉樣P物質(zhì)(SAP)
日本色鹽桿菌2型豬鏈球菌溶血抗體Anti-FGB Antibody血漿過(guò)氧化物(GPX3)
解鳥(niǎo)克雷伯菌肺表面活性蛋白A抗體Anti-FGF1 Antibody血紅氧合2(HO2)
綠色鏈霉菌肺表面活性蛋白A抗體Anti-FGF1 Antibody血紅氧合1(HO1)
多粘類芽孢桿菌葡萄糖-6磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體Anti-FGF1 Antibody血紅結(jié)合蛋白(HPX)
枯草芽孢桿菌線粒體琥珀脫氫D抗體Anti-FGF1 Antibody血紅蛋白μ(HBμ)
叢毛紅曲類固硫酯抗體Anti-FGF10 Antibody血紅蛋白θ1(HBθ1)
腐質(zhì)霉固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白抗體Anti-FGF10 Antibody血紅蛋白ζ(HBζ)
傘枝犁頭霉轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族39成員7抗體Anti-FGF13 Antibody血紅蛋白ε1(HBε1)
迪吉氏黃桿菌碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4突變型抗體Anti-Fgf19(Fgf15) Antibody血紅蛋白δ(HBδ)
木賊鐮刀菌磷化認(rèn)知缺陷突觸相關(guān)蛋白SynGAP抗體Anti-FGF19 Antibody血紅蛋白γ2(HBγ2)
Sphingobium fuliginis Syndecan 3蛋白抗體Anti-FGF19 Antibody血紅蛋白γ1(HBγ1)
染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白2抗體空腸彎曲菌hFoB1.19:SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞
染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白5抗體液化MGC80-3人胃癌細(xì)胞
染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白6抗體黑曲霉 ACHN人腎癌細(xì)胞
SLAMF6抗體淺白隱球酵母3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞
PRMT5酶活性抑制劑(EPZ015666)豬瘟病間接抗體 3,5-二羥基苯甲核磷化
細(xì)麗擬盤(pán)多毛孢 六甘縮
釀酒酵母 3--2-氟磺脲類藥物受體
花楸盤(pán)多毛孢 5-甲氧基水楊轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族M成員4
果生鏈核盤(pán) BOC-L-2-溴苯山梨脫氫
厄氏 N-乙基-2-氨甲基吡咯烷肌分化因子
核盤(pán) Otilonium Bromide生肌因子5
枯草芽孢桿 L-(-)-α-氨基-ε-己內(nèi)酰鹽鹽神經(jīng)鞘磷脂
金黃色葡萄球 聚二烯二甲基化溶液核糖核A
伯頓生絲畢赤酵母 聚二烯二甲基化溶液核呼吸因子2
平菇 聚二烯二甲基化溶液二?;视王;D(zhuǎn)移2
香菇 聚二烯二甲基化溶液二酰基甘油?;D(zhuǎn)移1
枯草芽孢桿 3-苯基-1H-吡唑-4-甲木聚糖
毛栓孔 2,3-二磷核糖焦磷
芽胞桿 八甘單甲單羧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
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