GLUT1抑制劑(BAY-876)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10815

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱(chēng)：GLUT1抑制劑(BAY-876)

英文名稱(chēng)：BAY-876

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10815

產(chǎn)品介紹:

BAY-876是IC50為0.002uM高選擇性的GLUT1抑制劑，在體外有很好的代謝能力，在體內(nèi)有高的生物利用率。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1799753-84-6

純度：98.0%

分子量：496.42

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

瓦克青霉大鼠煙堿型乙酰受體Anti-OR10G9 Antibody人解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)

氏假單胞菌小鼠破骨分化因子Anti-OR10H2 Antibody人解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)

新月彎孢大鼠蕈堿型乙酰受體Anti-OR10H3 Antibody人β位淀粉樣前體蛋白裂解2(BACE2)

那波鏈霉菌小鼠Toll樣受體9Anti-OR10H4 Antibody人β位淀粉樣前體蛋白裂解2(BACE2)

藻苔金黃桿菌人基質(zhì)衍生因子1βAnti-OR10J3 Antibody人核磷化1(UPP1)

弱黃色粘球菌人干因子受體Anti-OR10J5 Antibody人核磷化1(UPP1)

Pseudomonas argentinensis 小鼠鉤端螺旋體IgGAnti-OR10J1 Antibody人乙脫氫(ADH)

小白孢枝瑚菌大鼠活化蛋白CAnti-OR10J6P Antibody人乙脫氫(ADH)

人干因子/肥大生長(zhǎng)因子Anti-OR10J6P Antibody人乙脫氫(ALDH)

泡盛曲霉大鼠甘肽/甘Anti-OR10R2 Antibody人乙脫氫(ALDH)

匍匐曲霉原變種小鼠生長(zhǎng)激釋放肽ghrelinAnti-OR10S1 Antibody人Rho家族GTP1(RND1)

假絲酵母屬小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑Anti-OR10K1 Antibody人Rho家族GTP1(RND1)

猴頭菇人可溶性CD40配體Anti-OR10T2 Antibody人受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激2(RIPK2)

白僵菌大鼠α葡萄糖Anti-OR10X1 Antibody人受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激2(RIPK2)

腸沙門(mén)氏菌腸亞種傷寒血清型人可溶性CD30配體Anti-OR11G2 Antibody人磷脂爬行1(PLSCR1)

酵母屬小鼠溴脫氧核Anti-OR10V1 Antibody人磷脂爬行1(PLSCR1)

神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白2抗體#綠僵菌人黑色瘤細(xì)胞

RMND5B蛋白抗體平菇(高溫灰平)人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞

RNA結(jié)合蛋白15抗體平菇(四季美)人卵巢顆粒腫瘤細(xì)胞

受體結(jié)合絲蘇激3抗體平菇(肺形)自然殺傷T細(xì)胞
GLUT1抑制劑(BAY-876)泡盛曲霉營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（中國(guó)藥典）弓形蟲(chóng)

谷棒桿新生霉脈絡(luò)叢腦膜炎病

擬莖點(diǎn)霉大豆酪蛋白消化物瓊脂培養(yǎng)基抗脊髓灰質(zhì)炎Virues1-3 IgG抗體

釀酒酵母支原體瓊脂培養(yǎng)基（含精）糜蛋白

蠟樣芽胞桿 (蠟狀芽胞桿) 麥迪、麥白霉檢定培養(yǎng)基（普通輕質(zhì)斜面培養(yǎng)基）白三烯

溫特曲霉煙色變種阿奇霉檢定培養(yǎng)基肥大類(lèi)胰蛋白

指甲絨隱球酵母制霉檢定培養(yǎng)基類(lèi)胰蛋白

檸條根瘤志賀氏增肉湯腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子

假白布勒酵母多粘B用培養(yǎng)基神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3

枯草芽孢桿檢定培養(yǎng)基9號(hào)血小板生成

粗毛栓精雙水解試驗(yàn)用培養(yǎng)基（AD）白介32

枯草芽胞桿麥康凱瓊脂(不含鹽)高遷移率族蛋白B1

強(qiáng)壯類(lèi)芽孢桿血瓊脂基礎(chǔ)2號(hào)8羥基脫氧鳥(niǎo)

豬瘟病多粘B白介17

熒光假單胞腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基成纖維生長(zhǎng)因子
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)