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貨號 | FS-X10680 |
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中文名稱:Hsc70/Hsp70新型小分子抑制劑(VER-155008)
英文名稱:VER-155008
產品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10680
產品介紹:
VER-155008是Hsc70/Hsp70新型小分子抑制劑,對HCT116細胞GI50值為5uM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1134156-31-2 純度:98.83% 分子量:556.4 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
需鈉弧菌腎上腺能受體2抗原Anti-ARRDC3 Antibody白介17(IL17)
異常漢遜酵母促腎上腺皮質激釋放因子Anti-ARRDC4 Antibody白介16(IL16)
枯草芽孢桿菌降鈣(抗原)Anti-ARSF Antibody白介15(IL15)
蠟狀芽孢桿菌降鈣受體(抗原)Anti-ARSE Antibody白介13(IL13)
根霉鐵蛋白抗原Anti-ARSG Antibody白介12受體β2(IL2Rβ2)
小單孢菌色 C(抗原)Anti-ARSK Antibody白介12B(IL12B)
球毛殼腎上腺能受體β3Anti-ARSI Antibody白介12A(IL12A)
釀酒酵母巨化病(多肽)Anti-ARSK Antibody白介12(IL12)
豬鏈球菌多巴脫羧(抗原)Anti-ART1 Antibody白介11受體α(IL11Rα)
楊樹細盾霉(都不提供)人表皮生長因子受體-8(多肽片斷抗原)Anti-ART4 Antibody白介11(IL11)
Clostridium sp.α-L-阿拉伯呋喃糖抗原Anti-ASCL1 Antibody白介10受體α(IL10Rα)
雅致小克銀漢霉鱗狀癌抗原Anti-ASAP2 Antibody白介10(IL10)
污白干酪菌內皮-1(多肽抗原)Anti-ASAP3 Antibody白喉合(DPH5)
毛霉狀卷霉內皮-1(抗原)Anti-ARX Antibody巴特蛋白(BART)
大腸埃希氏菌內質網Aβ相關結合蛋白(抗原)Anti-ASCL2 Antibody八聚體結合轉錄因子4(OCT4)
松杉靈芝相關血漿蛋白AAnti-ASF1B Antibody八聚體結合轉錄因子2(OCT2)
植烷酰羥化2相互作用蛋白抗體Sphingomonasjaponica小鼠T淋巴細胞
旁瘤抗原MA1抗體腸沙門氏菌腸炎亞種人支氣管上皮細胞
核糖核結合蛋白2抗體遲緩愛德華氏菌雞肝癌細胞
胰腺特異轉錄因子PTF1A抗體Massiliatieshanensis人肥大細胞
Hsc70/Hsp70新型小分子抑制劑(VER-155008)黃藍狀 2,2,3,3-四氟血紅蛋白抗體
多食鞘氨桿 (+)-甲薄荷酯血清總補體
釀酒酵母 烯基基硅烷和肽
鞘氨單胞屬 丁炔二二甲酯藍舌病抗體
白長鏈霉 頻那纖溶
光柄滑銹傘 三氟甲磺鈰早孕因子蛋白
植物乳桿 二氟抵抗
Paraburkholderia sp. 基乙(PA)狂犬病IgG抗體
葡萄座腔 N,N-二甲基酰狂犬病IgM抗體
凝結芽胞桿 (S)-(-)-β-香茅狂犬病IgA抗體
橙黃紅酵母 二甲基二化錫羧甲基纖維
根霉 甲基烯異酯α葡萄糖
雅致放射毛霉 N-甲基嗎啉-N-氧化物β葡萄糖
哈茨木霉 二一溴脲
枯草芽孢桿枯草亞種 二一溴凝乳
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