不可逆抑制劑(Pentostatin)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10487

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：不可逆抑制劑(Pentostatin)

英文名稱：Pentostatin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10487

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Pentostatin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

Pentostatin是一種高效的adenosine deaminase的不可逆抑制劑，Ki值為2.5pM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：53910-25-1

別名：Deoxycoformycin

純度：99.77%

分子量：268.27

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜中溫居冰菌磷化絲/蘇蛋白激39抗體Anti-FGF8 Antibody血管內(nèi)皮蛋白C受體(PROCR)

枯草芽孢桿菌磷化轉(zhuǎn)錄生長(zhǎng)因子SP1抗體Anti-FGFR1 Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3(VEGFR3)

Pseudomonas oryzihabitans分選連接蛋白4抗體Anti-FGF8 Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR2)

菜豆間座殼分選連接蛋白9抗體Anti-FGF9 Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR1)

克魯斯假絲酵母分選連接蛋白10抗體Anti-FGFR2 Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D(VEGFD)

灰色鏈霉菌銹色變種分選連接蛋白11抗體Anti-FGFR1 Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C(VEGFC)

地衣芽孢桿菌分選連接蛋白6抗體Anti-FGFR2 Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B(VEGFB)

威特弗拉里亞鞘盒菌生成相關(guān)蛋白3抗體Anti-FGR Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA)

馬德里毛殼磷化非受體酪激c-Abl抗體Anti-FGG Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165(VEGF165)

花生根瘤菌SRC有絲分裂相關(guān)蛋白68抗體Anti-FGFR4 Antibody血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子145(VEGF145)

肉質(zhì)鏈霉菌SH3BGRL2蛋白抗體Anti-FH Antibody血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(CDH5)

戈登氏菌（加詞待譯）鈉離子通道相關(guān)蛋白1抗體Anti-FHIT Antibody血管緊張Ⅲ(AngⅢ)

食石油類諾卡氏菌SH3結(jié)構(gòu)域激結(jié)合蛋白1抗體Anti-FHL1 Antibody血管緊張Ⅱ受體2(AGTR2)

桃中田殼小圓孢菌Src家族相關(guān)磷化蛋白2抗體Anti-FHL1 Antibody血管緊張Ⅱ受體1(AGTR1)

釀酒酵母SLAP2抗體Anti-FHL3 Antibody血管緊張Ⅰ(AngⅠ)

布氏假單胞菌淋巴胞漿蛋白2抗體Anti-Fibronectin(FN1) Antibody血管緊張1-9(Ang1-9)

鈣周期結(jié)合蛋白抗體解酯假絲酵母解酯變種THP-1人急性白血病單核巨噬細(xì)胞株

葡萄糖-6磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體綠曲霉C2C12小鼠成肌細(xì)胞系

SNAPC3蛋白抗體褐單梗曲霉CHL倉(cāng)鼠肺細(xì)胞

泛相關(guān)修飾蛋白特異性蛋白5抗體間型脈孢菌CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
不可逆抑制劑(Pentostatin)美澳型核果褐腐病 Phe-Phe磷化混合譜系激域樣蛋白

豬丹絲聚(乙二)甲基烯酯甲基化

雅致栓孔 3,4-二甲基二苯甲酮二?；视王；D(zhuǎn)移

東方伊薩酵母 L--15NCD47分子

白淺灰鏈霉 L--15NCD42D分子

納瓦河部落奇異球 3-(三氟甲基)芐基硫磷烯式酮

綠色鏈霉 (S)-4-氨基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁生長(zhǎng)促分泌受體

小孔異擔(dān)子氮化鋯磷化鈣調(diào)依賴性蛋白激IV

洛格酵母聚乙烯吡咯烷酮絡(luò)合物組三聚體核結(jié)合蛋白2

黑曲霉 2,3-二氟-4-甲氧基苯甲丁酰酯

貝倫格勒座腔梨專化型 2,6-二氟-4-甲氧基苯甲單核趨化蛋白5

海南吉爾霉氮化銦(III)球蛋白D

pLCDH-ciR 氮化鎵心肌肌凝蛋白抗體

甜芝(靈芝屬之一種) 去甲托品酮鹽鹽金黃色葡萄球

谷棒桿Ⅲ型 2-(二-叔丁膦)-2'-甲基聯(lián)苯促吞噬肽
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)