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貨號(hào)	FS-X10887

產(chǎn)品介紹:

OSI-420是erlotinib的活性代謝物，erlotinib為表皮生長因子受體酪an酸激酶(EGFR tyrosin kinase)抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：183320-51-6

別名：Desmethyl Erlotinib;CP-473420

純度：98.90%

分子量：415.87

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：EGFR tyrosin kinase抑制劑（OSI-420）

英文名稱：OSI-420

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10887

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

釀酒酵母小鼠Ⅰ型膠原Anti-SLC9A6 Antibody人性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)

硬結(jié)節(jié)桿菌人抗Anti-SLC9A7 Antibody輕鏈lambda(λ-IgLC)

香菇人抗核糖體P蛋白抗體Anti-SLC9A3R2 Antibody輕鏈lambda(λ-IgLC)

枯草芽孢桿菌小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽Anti-SLC9A8 Antibody人肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)

薄花邊皮傘大鼠單核趨化蛋白1Anti-SLCO1B1 Antibody人肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物(pMHC)

癭青霉小鼠可溶性P選擇Anti-SLCO1A2 Antibody人皮膚淋巴相關(guān)抗原(CLA)

蘋果鏈格孢人抗骨骼肌抗體Anti-SLIT3 Antibody人皮膚淋巴相關(guān)抗原(CLA)

硫氧化檸檬胞菌大鼠單核趨化蛋白2Anti-SLIT2 Antibody人凝血血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)

紅色鹽幾何形菌大鼠單核趨化蛋白3Anti-SLC9A9 Antibody人凝血血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)

布氏乳桿菌人甲狀腺抗體Anti-SMAD1 Antibody人溶血補(bǔ)體(Hc)

枇杷假尾孢小鼠S0蛋白Anti-SLU7 Antibody人溶血補(bǔ)體(Hc)

平菇小鼠白介1Anti-SLK Antibody人T受體(TCR)

枯草芽孢桿菌人胰島抗體Anti-SMAD1 Antibody人T受體(TCR)

模擬乳粉霉菌酵母菌質(zhì)控樣品(定量)大鼠巨噬集落激因子Anti-SMAD2 Antibody人狼瘡抗凝抗體(LAC/LA)

黃色粘球菌*大鼠巨噬來源的趨化因子Anti-SMARCA2 Antibody人狼瘡抗凝抗體(LAC/LA)

枯草芽孢桿菌人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體Anti-SMARCC2 Antibody人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)

環(huán)指蛋白98抗體血耳抗人谷光甘肽轉(zhuǎn)移單抗FMU-GST17

形成相關(guān)凋亡蛋白7抗體枝孢霉皰疹病毒單抗7

轉(zhuǎn)移生長因子β受體2抗體TGF-βRⅡ，TGFβRⅡ白黃小薄孔菌（斜面）ACV1

腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體教酒鏈霉菌H1H8
EGFR tyrosin kinase抑制劑（OSI-420）委內(nèi)瑞拉鏈霉聯(lián)氨/N2H4肉絳蟲IgE抗體

白僵亞硝鹽氮/NO2-N衣原體抗體

解脂假絲酵母五苯硫抗性

根瘤亞硝根（亞硝鹽）/NO2-抗性磷5b

溴離子（溴化物）/Br-I型膠原交聯(lián)羧基端肽

枯草芽孢桿呋喃-2-游離甲狀腺

鴨疫里氏桿總氮/N游離狀腺原

枯草芽孢桿硝鹽氮/NO3-N三磷腺

枯草芽孢桿 4'-代苯乙酮幽門螺桿相關(guān)基因蛋白A

假單胞銣/Rb磷糖異構(gòu)

根瘤磷根（磷鹽）/PO43-雌酮

根霉 4-氨基-1-丁神經(jīng)酰

雞腸球離子(化物)/I-腎

黃桿 Fmoc-L-瓜硫肝

炭疽芽孢桿離子/NH4+鈣調(diào)磷

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