VEGFR2抑制劑(XL184)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10678

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：VEGFR2抑制劑(XL184)

英文名稱：Cabozantinib S-malate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10678

產(chǎn)品介紹:

Cabozantinib S-malate是一種有效的VEGFR2抑制劑，IC50值為0.035nM，同時(shí)能夠抑制c-Met，Ret，Kit，F(xiàn)lt-1/3/4，Tie2和AXL的活性，IC50值分別為1.3nM，4nM，4.6nM，12nM/11.3nM/6nM，14.3nM和7nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1140909-48-3

別名：XL184;Cabozantinib

純度：99.83%

分子量：635.59

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

雪腐鐮刀菌半胱蛋白蛋白-3（抗原）Anti-ARHGAP11A Antibody白介22受體α2(IL2Rα2)

黃曲霉半胱蛋白蛋白-6（抗原）Anti-ARHGAP1 Antibody白介22受體(IL2R)

鏈霉菌屬白介1-β轉(zhuǎn)化樣凋亡蛋白6（抗原）Anti-ARFGEF2 Antibody白介22(IL22)

曲霉平展變種白介1-β轉(zhuǎn)化樣凋亡蛋白6（抗原）Anti-ARHGAP17 Antibody白介21受體(IL21R)

卵孢柱枝孢半胱蛋白-10（抗原）Anti-ARHGAP18 Antibody白介21(IL21)

糞腸球菌半胱蛋白蛋白-13（抗原）Anti-ARHGAP9 Antibody白介20(IL20)

中度嗜熱雙突柄菌CD19Anti-ARHGDIA Antibody白介2(IL2)

葡萄孢霉屬雙鏈RNA腺脫基抗原（N端）Anti-ARHGEF10 Antibody白介1受體關(guān)聯(lián)激4(IRAK4)

管毛殼雙鏈RNA腺脫基抗原Anti-ARHGEF11 Antibody白介1受體關(guān)聯(lián)激3(IRAK3)

非洲黑蛋巢基質(zhì)金屬蛋白9Anti-ARHGEF11 Antibody白介1受體關(guān)聯(lián)激2(IRAK2)

紫荊生葉點(diǎn)霉菌牛結(jié)核桿菌菌體蛋白Anti-ARHGEF12 Antibody白介1受體關(guān)聯(lián)激1(IRAK1)

香菇Muellerian抑制因子抗原Anti-ARHGEF12 Antibody白介1受體輔助蛋白樣蛋白2(IL1RAPL2)

子午線假單胞菌AEG-1抗原Anti-ARHGEF19 Antibody白介1受體輔助蛋白(IL1RAP)

口腔支原體血小板內(nèi)皮黏附分子-1（抗原）Anti-ARHGEF16 Antibody白介1受體Ⅱ(IL1R2)

長(zhǎng)野解支鏈淀粉芽孢桿菌脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗原Anti-ARHGEF2 Antibody白介1受體Ⅰ(IL1R1)

扶桑本森頓酵母免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1Anti-ARHGEF3 Antibody白介1家族成員9(IL1F9)

氧化裝配因子PET112抗體創(chuàng)傷弧菌人結(jié)腸MatchPair: 結(jié)腸上皮和腫瘤組織提取物

對(duì)氧磷3抗體約氏乳桿菌人肺MatchPair: 肺上皮和腫瘤組織提取物

朊蛋白CD230抗體Oleispiraantarctica人卵巢顆粒腫瘤細(xì)胞

枯草溶菌轉(zhuǎn)化1抑制劑抗體SphingomonaspituitosaSK-GT-2
VEGFR2抑制劑(XL184)白地霉五氟苯硫副結(jié)核抗體

短小芽孢桿五氟β-防御

Rhizobium 2,3,4,5,6-五氟苯α乳清蛋白

發(fā)酵乳桿 3-乙蛋清白蛋白

短芽孢桿 2-氟-6-硝苯副結(jié)核分枝桿抗體

異常漢遜酵母 1-金剛烷α-半乳糖

細(xì)鏈格孢 1-溴金剛烷異鎖鏈

硬毛栓孔 1,4-雙(二苯膦基)丁烷I型膠原蛋白

濟(jì)南諾卡氏三苯二酰基甘油

死亡谷芽孢桿 1,4-哌二乙磺二鈉鹽維生K

帽形黃色土桿 3-氟苯基γ-谷氨酰環(huán)化轉(zhuǎn)移

大腸埃希氏三苯基5-羥脯

黑根霉 (二甲基)苯基硅烷谷氨酰半胱連接

蟻巢傘屬三基硅烷合成

淺黃金色單胞基基硅烷肝型脂肪結(jié)合蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)