當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T棘球蚴?。‥c)核酸定性檢測試劑盒
PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
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參數規(guī)格:
產品名稱:棘球蚴?。?/font>Ec)核酸定性檢測試劑盒
產品規(guī)格:50T
產品貨號:FS-P10657
產品分類:PCR法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
季也蒙假絲酵母生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
惡齒唾液鏈球菌模式菌株: 未知
惡臭假單胞菌培養(yǎng)基: 0002檢測土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 30-37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0103產肌苷。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
蘇云金芽胞桿菌培養(yǎng)基: 0002能產生殺蟲晶體蛋白和其他殺蟲素,用于科研和開發(fā)生物農藥。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結法
黃曲霉生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 14提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法
-999℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
豬丹絲菌研究模式菌株: no丹豬提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 396生長條件: 37
大腸埃希氏菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: 33提供形式: 斜面培養(yǎng)物;凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
KCTC19009模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Nocardiopsis│baichengensis中國超鹽性土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 2905生長條件: 28℃
Z7025作為粘細菌聚酮合酶的的基因篩選庫,分析和篩選聚酮基因的多樣性模式菌株: no種屬: Polyangium│brachysporum提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 844生長條件: 30℃
美澳型核果褐腐病菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no自然發(fā)病果提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 22-25 定期移植法
哈氏弧菌培養(yǎng)基: 524模式菌株: no海藻表面提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法
-1000℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
Neisseria meningitidis模式菌株: 未知
SSI82000血清型:O6:K54:H10模式菌株: no種屬: Escherichia coli提供形式: 凍干粉安全等級: 1培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。[注] 培養(yǎng)芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件: 37℃,好氧
2-基吩噻嗪
2--6-基并噻唑
雙草氧化鈦(IV)鉀二水合物
4,4’-(2,2,2-三-)亞乙基雙(1,2-二)
Hexamethylene diacrylate 1,6-己二醇二丙烯酯 13048-33-4
Aluminum acetylate 乙酰丙鋁 13963-57-0
Aluminium phosphate 磷鋁 7784-30-7
Diethylene glycol diacrylate 二乙二醇雙丙烯酯 4074-88-8
大鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管內皮生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)免疫試劑盒 Human VEGFR-3/Flt-4 ELISA Kit
人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3 Ab-IgG)ELISA試劑盒 ,英文名: PR3 Ab-IgG ELISA Kit
RatIerleukin32,IL-32ELISA試劑盒大鼠白介素32(IL-32)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanglamicaciddecarboxylase,GADELISA試劑盒人谷氨脫羧酶(GAD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanIPO-38ELISAKit人IPO-38蛋白(IPO38)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
棘球蚴?。?/font>Ec)核酸定性檢測試劑盒蟛蜞菊內酯524-12-9中文別名:蟛蜞菊內酯
英文名:Wedelolactone
英文別名:1,8,9-Trihydroxy-3-methoxy-6H-benzofuro[3,2-c][1]benzopyran-6-one
登錄號:524-12-9
分子式:C16H10O7
分子量:314.25
分子結構:
外觀:白色結晶
規(guī)格:20 mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:菊科植物墨旱蓮Eclipta prostrasta L.的地上部分
溶解性:可溶于、DMSO等溶劑,不溶于、二。
熔點:327~328℃
藥理藥效:抗肝作用、抗肝作用、止血作用。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
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