實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
BCRC13377=DSM43859=IFO14371=KCTC9745=KCTC模式菌株: yes安全等級(jí): 1種屬: Kitasatospora│griseola土壤提供形式: 凍干物模式菌株;產(chǎn)生setamycine培養(yǎng)基: 0038

硫氧化湖沉積桿菌有機(jī)污染物降解菌/多環(huán)芳烴(PAHs)降解菌模式菌株: no沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 25℃

青色鏈霉菌生長(zhǎng)條件: 28℃培養(yǎng)基: 0012提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

聚生殼菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no種子提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25 -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法

戊糖片球菌培養(yǎng)基: 6模式菌株: no發(fā)霉谷子提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 24℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他

鐮孢生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -375℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

熱帶假絲酵母培養(yǎng)基: CM0077固體發(fā)酵釀酒。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

球毛殼生長(zhǎng)條件: 20-25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)條件: 37℃研究提供形式: 凍干物安全等級(jí): 3模式菌株: no 真空冷凍干燥法

茄絲核菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no馬尾松提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 26 定期移植法

 ATCC29358質(zhì)量控制菌株模式菌株: no種屬: Pediococcusdamnosus拉格啤酒酵母安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 26℃

節(jié)桿菌屬培養(yǎng)基: CM0002模式菌株: no冬蟲(chóng)夏草菌膜提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 -376℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

鏈霉菌屬菌種抗黑曲霉模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0027生長(zhǎng)條件: 28C

考克氏菌生物轉(zhuǎn)化微生物/硫氧化微生物 產(chǎn)酶微生物/蛋白酶模式菌株: no沉積物/TVG含礦沉積物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 25℃

丹寧Tannic acidAR500g

B5002-100mg5-溴-2-脫氧尿苷59-14-3100mg46

0122-500GD-Mannitol D-甘露醇69-65-8500g

DAPI Staining Solution

2-(N-嗎非啉)乙磺25g

環(huán)氧丙烷¤EpoxypropaneGCS5ml

SM0623O`RangeRuler 100bp DNA Ladder, ready-to-use177

G8772-50GGlass beads,acid-washed 玻璃珠/50g

檸檬三鈉(枸櫞三鈉)100g

X-Gluc50mg

大鼠血幼素(HJV)ELISA試劑盒 ，英文名： HJV ELISA Kit

Duck IgG (aPT1/aPT2) ELISA Kit 鴨抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒

Mousebasicfibroblastgrowthfactor6,bFGF-6ELISAKit 小鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanCollagenaseTypeIIELISAKit人膠原酶II規(guī)格：48T/96T

CDK2/CYCLINA激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitU-TSH大鼠高靈敏度促甲狀腺激素規(guī)格：48T/96T
犬巴貝斯蟲(chóng)(Bab)核酸檢測(cè)試劑盒CAYE培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于致病性大腸埃希氏菌的產(chǎn)培養(yǎng)

妥布霉素藥敏紙片規(guī)格：10ug/片，20片/瓶拉丁屬名：Tobramycin（TM）

甲基綠規(guī)格：5g用途：微生物指示劑

LB瓊脂（lennox）規(guī)格：250g用途：用于分子生物學(xué)中大腸桿菌的培養(yǎng)

幽門(mén)螺旋桿菌添加劑規(guī)格：1ml*5用途：每支添加于93ml幽門(mén)螺旋桿菌培養(yǎng)基中

液體硫乙醇鹽培養(yǎng)基（不含瓊脂）規(guī)格：250g用途：用于混濁制品需氧菌無(wú)菌試驗(yàn)