NF-κB抑制劑(JSH-23)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10480

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：NF-κB抑制劑(JSH-23)

英文名稱：JSH-23

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg

貨號(hào)：FS-X10480

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：JSH-23

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg

JSH-23是一種NF-κB抑制劑，IC50值為7.1μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：749886-87-1

純度：99.10%

分子量：240.34

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)鏈格孢RGAG4蛋白抗體Anti-ESR2 Antibody眼小畸形關(guān)聯(lián)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)

芽孢桿菌屬受體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體Anti-ESRRG Antibody眼皮膚白化病Ⅱ蛋白(OCA2)

吸水鏈霉菌吸水亞種癌和卵巢癌易感基因RAD51C抗體Anti-ETF1 Antibody鹽皮質(zhì)激受體(MR)

鏈格孢磷化核糖體蛋白S6激家族RSK3抗體Anti-ETF/TEAD2 Antibody巖藻糖激(FUK)

產(chǎn)紅青霉磷化核糖體蛋白S6激家族RSK3抗體Anti-ETS1 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移9(FUT9)

波茨坦短芽孢桿菌磷化Ras特異性鳥(niǎo)核釋放因子1Anti-ETV4 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移8(FUT8)

球孢白僵菌磷化核糖體S6激RSK2抗體Anti-EYA4 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移7(FUT7)

聚生殼菌磷化核糖體S6激RSK2抗體Anti-EXO1 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移6(FUT6)

水棲黃桿菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-ETV6 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移5(FUT5)

產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-EWSR1 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移4(FUT4)

平菇磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-EVA1A Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移3(FUT3)

鏈格孢磷化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1抗體Anti-EZH2 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移2(FUT2)

鮮綠青霉磷化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1抗體Anti-F2 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移11(FUT11)

硫磺絢孔菌mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體Anti-F2 Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移10(FUT10)

蠟狀芽孢桿菌（現(xiàn)1）磷化mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體Anti-F2(Thrombin) Antibody巖藻糖基轉(zhuǎn)移1(FUT1)

大腸埃希菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-F2R Antibody巖藻糖變旋(FucM)

: F486資源名稱: 鮮綠青霉質(zhì)量規(guī)格：>98%

漢遜德巴利酵母Debaryomyces│hansenii 質(zhì)量規(guī)格：0.98

豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,BR
NF-κB抑制劑(JSH-23)根瘤 3-(三苯甲基巰基）胸腺基質(zhì)生成

卵形巴貝斯蟲(chóng)（張家川株） 3,5-二氟線粒體呼吸鏈復(fù)合物III

尖孢鐮刀 3,4-二氟視黃

噬肌畢赤酵母 2,5-二氟抑瘤M

棒曲霉 3,5-二溴生長(zhǎng)關(guān)聯(lián)蛋白43

卷枝毛霉異喹啉-3-羧甲酯M型肌激

解脂復(fù)膜孢酵母異硫熒光膽固7α單氧

運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 3,5-二甲甲酯色P450家庭成員27A1

赤水太白山 5-溴-2-苯基吡啶色P450家庭成員8b1

Ramlibacter sp. 5--1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲色P450家庭成員7b1

香菇 D-erythro-sphingosine-1-phosphate角蛋白20

馬紅球 9,10-二(1-萘基)蒽色C氧化

韓國(guó)溶桿 2-氨基-4,5-二甲氧基苯磷三酯

蘇云金芽孢桿 6-溴-1-己烯內(nèi)酯

Hymenobacter perfusus 對(duì)苯乙烯磺鈉
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)