TGFβR-I抑制劑(LY-364947)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10729

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：TGFβR-I抑制劑(LY-364947)

英文名稱：LY-364947

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10729

產(chǎn)品介紹:

LY-364947是一種有效的，ATP競爭性的TGFβR-I抑制劑，IC50值為59nM，是對TGFβR-II選擇性的7倍。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：396129-53-6

別名：HTS466284

純度：98.91%

分子量：272.3

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

金頂側(cè)耳微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原Anti-DP-2 Antibody人神經(jīng)絲蛋白(NF)

炭疽芽孢桿菌酪酪肽多肽（1-36）Anti-DPP7 Antibody人神經(jīng)絲蛋白(NF)

淺灰白鏈霉菌Rad51抗原Anti-DPYSL2 Antibody人利尿肽(KP)

蠟狀芽孢桿菌Rap1A抗原Anti-DPYSL2 Antibody人利尿肽(KP)

淡青鏈霉菌維甲受體-β抗原Anti-DPPA4 Antibody人神經(jīng)降壓(NT)

大腸埃希氏菌Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經(jīng)降壓(NT)

青藍(lán)馬杜拉放線菌抵抗抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經(jīng)激肽B(NKB)

毛霉屬G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原Anti-DQX1 Antibody人神經(jīng)激肽B(NKB)

RhoA抗原Anti-DRD4 Antibody人強啡肽(Dyn)

大腸埃希氏桿菌RhoC抗原Anti-DROSHA Antibody人強啡肽(Dyn)

皺紋單胞菌環(huán)指蛋白148抗原Anti-DRD1 Antibody人腦啡肽(ENK)

基利恩帚枝霉Rho相關(guān)蛋白激1抗原Anti-DROSHA Antibody人腦啡肽(ENK)

釀酒酵母Rho相關(guān)蛋白激2抗原Anti-DSG1 Antibody人γ肽(Pγ)

Bacillus methylotrophicus核受體RXRα抗原Anti-DUSP1 Antibody人γ肽(Pγ)

矩圓黑盤孢6-磷山梨脫氫抗原Anti-DTYMK Antibody人C型鈉尿肽(CNP)

小麥曲根霉S100B蛋白抗原Anti-DUS2 Antibody人C型鈉尿肽(CNP)

轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體貝酵母人胃癌細(xì)胞（未分化）

淋巴細(xì)胞胞漿蛋白LCP1抗體白球擬酵母人食管鱗癌細(xì)胞

黑色瘤優(yōu)先表達(dá)抗原抗體沼澤紅假單胞菌小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞

磷脂C1樣蛋白抗體類球紅細(xì)菌(球形紅桿菌)人胰腺腺泡上皮癌
TGFβR-I抑制劑(LY-364947)魯氏接合酵母 2--6-甲苯N末端C型利鈉肽前體

日本曲霉基氧鎓四氟鹽總膽固

豬丹絲酮基磷二甲酯低密度脂蛋白

大腸桿屬 5--1,10-菲咯啉高密度脂蛋白

聚生殼 1-苯基-2-炔-1-磷二酯4

球孢白僵 1,1,2-基-1H-苯并[e]磷二酯4

枯草芽孢桿異丁葉酯磷二酯5

四川散斑殼 1-溴-4-n-丁基苯KI-67抗原

居真細(xì) 7-甲氧基-2-萘滿酮增殖核抗原

球孢白僵 2,3,4,6-四芐基-D-吡喃葡萄糖煙酰腺二核磷

枯草芽孢桿 1--9，10-二苯乙炔基蒽3-硝基酪

南假單胞 2-苯肼鹽鹽絲蟲抗體

新疆鹽地桿 1,10-二溴癸烷ω干擾

凝結(jié)芽胞桿三-O-乙酰-D-半乳糖烯ε干擾

印度洋斯塔普氏三(2-氨基乙基)基質(zhì)衍生因子1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)