當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞組織染色>> EB染色液
貨號 | FS-X9832 |
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產(chǎn)品介紹:
EB染色液可用于細胞凋亡檢測,也可用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色,染色后可用熒光顯微鏡檢測或流式細胞儀檢測。EB不能穿過活細胞的細胞膜,然而可以通過死細胞破損的細胞膜而對細胞核DNA染色。EB含有一個可以嵌入的堆積堿基之間的一個平面基團,這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近,導(dǎo)致染料與DNA結(jié)合并呈現(xiàn)熒光。 儲存條件:4℃避光保存。 有效期:一年。 |
中文名稱:EB染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
貨號:FS-X9832
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
比卡魯英文名: Atenolol結(jié)蛋白樣蛋白CGNL1抗體包裝10g
吡非尼,哌非尼英文名: Atorvastatin calcium生長調(diào)節(jié)蛋白CGREF1抗體包裝50g
吡美莫司;匹美莫司英文名: Atorvastatin calcium富含亮軟骨蛋白抗體包裝1g
達卡巴英文名: Azacitidine (5-Azacytidine)軟骨蛋白樣蛋白抗體包裝25g
(無)英文名: Azacitidine (5-Azacytidine)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD3抗體包裝5g
一合物英文名: Azacitidine (5-Azacytidine)卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD10抗體包裝100g
/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核英文名: Azelastine HCl卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD7抗體包裝25g
多韋替尼乳鹽英文名: Azelastine HClATP依賴的解旋CHD1抗體包裝5g
多烯紫杉三合物英文名: Azithromycin染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白抗體包裝100g
多烯紫杉無/英文名: Azithromycin染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白2抗體包裝25g
二磺拉帕替尼英文名: Aztreonam染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白3抗體包裝5g
二氫卟吩e6英文名: Aztreonam染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白Mi2β抗體包裝1g
凡德他尼英文名: Baccatin IIIATP依賴的解旋CHD6抗體包裝5g
反鉑英文名: Baccatin IIIATP依賴的解旋CHD7抗體包裝1g
達拉賓英文名: BaclofenATP依賴的解旋CHD8抗體包裝25g
: A208資源名稱: 淺紫灰鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR胰島抗體試劑盒楊梅;Myricitrin
易變鏈霉菌Streptomyces│mutabilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標準品胰島自身抗體試劑盒泊;Etoposide
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:效價≥1300U/MG,BR胰島原試劑盒煙酰;Nicotinamide
EB染色液*蜜環(huán) 5-乙?;奏そ饘匐暮“宸磻?yīng)蛋白4
波茨坦芽孢桿 壬二二(2-乙基己基)酯骨保護配體
新城疫病 2--5-硝基嘧啶骨保護配體
藤黃檀根瘤 2--4-氟苯甲型肝炎病
大腸埃希氏桿 丁型肝炎病
黑靈芝 [1,3-雙(2,4,6-三基)-2-咪唑烷亞基][[2-(1-甲基-2-氧代氧基)苯基]亞單純皰疹病I
釀酒酵母 4-氟單純皰疹病II
鏈霉 (R)-(-)-1-氨基茚鹽鹽單純皰疹病III
短密青霉 DL-白瘤病
巨大芽胞桿 1--4-丁烷金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白7
木層孔 2-吡啶丁金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白12
泡囊短波單胞 三己角蛋白18-M65
*蜜環(huán) 1,3,5-三(4-氨基苯氧基)苯血管緊張轉(zhuǎn)化2
節(jié)桿 2,5-二吡啶-4-甲RHOG
長孢鏈霉 2-苯基二酰ARHGAP9
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