EGFR抑制劑(CO-1686)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10811

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：EGFR抑制劑(CO-1686)

英文名稱：CO-1686

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10811

產(chǎn)品介紹:

CO-1686是一種可EGFR抑制劑，能夠抑制EGFRL858R/T790M和EGFRWT的活性，IC50值分別為21.5nM和303.3nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1374640-70-6

別名：Rociletinib;AVL-301;CNX-419

純度：98.25%

分子量：555.55

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

硬結(jié)桿菌人間粘附分子3Anti-NREP Antibody人環(huán)磷鳥(cGMP)

糖化酵母小鼠抗核膜糖蛋白210抗體Anti-NRL Antibody人環(huán)磷鳥(cGMP)

釀酒酵母大鼠多巴D2受體Anti-NRL Antibody人脂蛋白磷脂A2(Lp-PL-A2)

根瘤菌大鼠β淀粉樣蛋白1-42Anti-NSG2 Antibody人脂蛋白磷脂A2(Lp-PL-A2)

孟氏假單胞菌人結(jié)締組織生長因子Anti-NRSN1 Antibody人內(nèi)皮脂肪(EL)

芍藥枝孢霉菌小鼠白介7Anti-NT5C1A Antibody人內(nèi)皮脂肪(EL)

Lysinibacillus xylanilyticus小鼠褪黑Anti-NT5C1A Antibody人橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )

齒孢青霉人白介18Anti-NT5C1B Antibody人橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α )

褐黃金錢菌大鼠CD44分子Anti-NTM Antibody人骨成型蛋白7(BMP-7)

巴氏醋桿菌羅旺亞種大鼠8羥基脫氧鳥Anti-NT5C3A Antibody人骨成型蛋白7(BMP-7)

內(nèi)(涂)鏈霉菌人粘膜相關(guān)上皮趨化因子Anti-NT5C1B Antibody人25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)

紫紅曲霉小鼠載脂蛋白HAnti-NTPCR Antibody人25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)

蠟狀芽孢桿菌大鼠白介1受體拮抗劑Anti-NTF4 Antibody人白三烯B4(LTB4)

藤黃色土生單胞菌人B活化因子受體Anti-NTRK3 Antibody人白三烯B4(LTB4)

長根小奧德蘑小鼠熱休克因子1Anti-NTSR2 Antibody人腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)

枯草芽孢桿菌人血管內(nèi)皮生長因子受體3Anti-NTRK2 Antibody人腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)

胰島β細(xì)胞生長因子RegIIIγ抗體姬松茸101人成骨肉瘤細(xì)胞

染色體分離調(diào)節(jié)蛋白1抗體褐口蘑人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（人膀胱癌細(xì)胞污染）

胰島β細(xì)胞生長因子RegIIIα抗體Ag18（蘑菇，閩1號）人小細(xì)胞肺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞

視網(wǎng)膜色變性蛋白1抗體白楊茶薪菇綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
EGFR抑制劑(CO-1686)花生生莖點霉鄰苯乙酮單核趨化蛋白1

大腸埃希 3-苯乙酮端粒

南冰川酵母 (1S)-(+)-樟腦－10－磺酰多巴

鏈格孢 -4-羧干擾誘導(dǎo)蛋白10

嗜鹽沉積物桿 4'-二甲基氨基苯乙酮過敏性遲緩反應(yīng)物質(zhì)

大腸埃希 (1R,2R)-N,N'-雙[3-氧代-2-(2,4,6-三酰)亞丁基]-1,2-二苯基乙二過氧化脂質(zhì);乳過氧化物

更新世肉桿 (S)-(+)-扁桃甲酯褐黑

解淀粉芽孢桿 1,2-十四碳二環(huán)磷鳥

假單孢 3-噻吩二環(huán)磷腺

曲霉 2,3,4-氧基苯甲緩激肽

葡萄酒有孢漢遜酵母 2--3-肌鈣蛋白T

曲霉 1-金剛烷甲?；|(zhì)金屬蛋白9

猴頭苊烯基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1

均態(tài)諾卡氏 8-羥基喹啉鋁降鈣基因相關(guān)肽

大腸埃希氏 1-甲基基-2-甲結(jié)合珠蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)