實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準曲線定量的方法。
外標(biāo)準曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
?
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：豬源性成分（Porcine）核酸定性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10696
產(chǎn)品分類：PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
尖鏈孢霉培養(yǎng)基: CM0014模式菌株: no莖提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 1生長條件: 25C -80℃冰箱凍結(jié)；礦物油法

毛柄金錢菌(金針菇)培養(yǎng)基: 0014食用、藥用提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃

大島芽孢桿菌培養(yǎng)基: 821模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他

產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no蜜蜂提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

鹽單胞菌培養(yǎng)基: 0223模式菌株: no泥樣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

苜蓿中華根瘤菌與苜蓿共生固氮模式菌株: no美國苜蓿根瘤菌提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0053生長條件: 28-30℃

 -1415℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

球孢白僵菌生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no

青霉大洋絲狀真菌模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 10℃

43297=ATCC17896芳烴類固醇模式菌株: no種屬: Rhodococcus  erythropolis提供形式: 凍干粉安全等級: 1培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂：蛋白胨 10.0 g，牛肉提取物 3.0 g，NaCl 5.0 g，瓊脂 15.0 g，蒸餾水 1.0 L，pH 7.0生長條件: 30℃，好氧

小單孢菌屬抗細菌；抗金黃色葡萄球菌；抗枯草芽孢桿菌模式菌株: no樹根土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C

變異棒桿菌培養(yǎng)基: 472能夠降解石油，柴油等烷烴類物質(zhì)，可用于生物修復(fù)。水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

綠粘帚霉生長條件: 25-28培養(yǎng)基: 14根際提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 定期移植法

 -1416℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

黑曲霉培養(yǎng)基: CM0085檸檬。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 定期移植法；其他

漢遜德巴利酵母培養(yǎng)基: 436模式菌株: no戈壁土提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

鹽吐根酚堿HCLS1  造血干特異性蛋白 兔抗人、大、小鼠磷化雌激素受體αIgG

鹽甜菜堿ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2)  蕈堿型乙酰膽堿受體（抗原） ESAIgG(標(biāo)記)

一枝蒿甲素C-Peptide( C-PEP )  C-肽（C肽） E選擇素IgG

異虎耳草素CR (Calretinin)  鈣結(jié)合蛋白（抗原） 內(nèi)皮素-1IgG

葉綠CRP (C-reactive protin)  C-反應(yīng)蛋白（抗原） 內(nèi)皮素-1IgG

羽扇烯酮ADORA3/A3AR(adenosine receptor A3)  腺苷受體A3抗原 內(nèi)皮素-1IgG

標(biāo)準品Integrin alpha V  巨噬來源的趨化因子αV多肽抗體

乙酰基二氫美味草phospho-AMPK alpha-1/PRKAA1(Thr198) peptide  磷化腺苷單磷活化蛋白激酶α1抗原 辣根過氧化物酶標(biāo)記內(nèi)皮素-1單克隆IgG

3-乙南美楝屬二CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1)  環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（抗原） 生物素標(biāo)記內(nèi)皮素-1單克隆IgG

葉黃制菌素phospho-CREB-1   磷化環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白（多肽） 電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽IgG
豬源性成分（Porcine）核酸定性檢測試劑盒PazufloxacinMesilate　甲磺帕珠沙星　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PazufloxacinMesilate　甲磺帕珠沙星（標(biāo)準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

Pefloxacinmesylatedihydrate　甲磺培氟沙星　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

Pefloxacinmesylatedihydrate　甲磺培氟沙星（標(biāo)準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PemetrexedDisodium　培美曲塞二鈉　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PemetrexedDisodium　培美曲塞二鈉（標(biāo)準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

Phthalylsulfathiazole　酞磺胺噻唑　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

Pioglitazonebase　匹格列　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

Pioglitazonebase　匹格列（標(biāo)準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PioglitazoneHCl　匹格列鹽鹽　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PioglitazoneHCl　匹格列鹽鹽（標(biāo)準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PizotifenMalate　噻啶蘋果鹽　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PolymyxinBSulfate　硫多粘菌素B　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PolymyxinBSulfate　硫多粘菌素B(標(biāo)準品)　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PramlintideAcetate　醋普蘭林肽　質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR