當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> UCHL5和Usp14活性抑制劑(b-AP15)
貨號 | FS-X10676 |
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產(chǎn)品介紹:
b-AP15特異性抑制去泛素化酶(deubiquitinating)UCHL5和Usp14活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1009817-63-3 別名:NSC 687852 純度:98.03% 分子量:419.39 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:b-AP15
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10676
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
中國臺灣假海源桿菌趨化樣蛋白Anti-ANKRD20A1 Antibody白介9受體(IL9R)
球孢白僵菌Anti-ANKRD30A Antibody白介9(IL9)
大腸埃希菌凋亡關(guān)聯(lián)酪激抗原Anti-ANKRD30A Antibody白介8受體β(IL8Rβ)
類檸檬形枝孢水通道蛋白-2(抗原)Anti-ANO1 Antibody白介8受體α(IL8Rα)
蒼白芽孢桿菌腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗原Anti-ANO7 Antibody白介8(IL8)
果生鏈核盤菌組織因子途徑抑制劑Anti-ANO9 Antibody白介7受體(IL7R)
硬毛栓孔菌葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白12Anti-AOX1 Antibody白介7(IL7)
葡萄球菌屬表皮生長因子受體III型突變體抗原Anti-ANOS1 Antibody白介6受體(IL6R)
土芽孢乳桿菌CD26抗原Anti-AP2A1 Antibody白介6(IL6)
pnz8149三磷腺結(jié)合盒亞家族G1抗原Anti-AOX1 Antibody白介5受體α(IL5Rα)
構(gòu)巢曲霉心肌特異性肌鈣蛋白TAnti-AP1G1 Antibody白介5(IL5)
油菜菌核病菌 β分泌(抗原)Anti-APBA2 Antibody白介4誘導(dǎo)蛋白1(IL4I1)
慢弧菌ABL1抗原Anti-AP3D1 Antibody白介4受體(IL4R)
根瘤菌α-L巖藻糖抗原Anti-APBB2 Antibody白介4(IL4)
香菇19Anti-APC Antibody白介3受體α(IL3Rα)
釀酒酵母Bax(多肽抗原)Anti-APBA3 Antibody白介35(IL35)
蛋白質(zhì)磷2A-B55抗體斯氏油脂酵母人直腸MatchPair :直腸上皮和直腸腫瘤組織提取物
棕櫚酰蛋白水解2抗體熊蜂生假絲酵母人胰腺MatchPair: 胰腺上皮和腫瘤組織提取物
多谷酰胺結(jié)合蛋白1抗體漢遜德巴利酵母人胃MatchPair: 胃壁和胃腫瘤組織提取物
肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合體亞基5抗體熱帶假絲酵母人腎MatchPair: 腎上皮組織和腫瘤組織提取物
UCHL5和Usp14活性抑制劑(b-AP15)褐球固氮 磷三辛酯沙門氏抗體
藍色犁頭霉 原乙三乙酯優(yōu)球蛋白
蘋果雙殼* (RS)-1H--2-羧支原體抗體
枯草芽胞桿 2-乙酰芴囊尾蚴IgG
火木層孔 9,10-二甲基蒽膠原
暗色擬莖點霉 原碳四乙酯1型膠原
美澳型核果褐腐病 苯基三乙氧基硅烷2型膠原
巨型艾美耳球蟲 (3-苯甲基)膦二乙酯端粒
枯草芽孢桿 順二二丁基錫端粒
黃硬皮馬勃 三羥甲基烷(TMP)微小隱孢子蟲病
土曲霉 2-乙酰檸檬三乙酯結(jié)核病γ干擾
泥生囊殼 (S)-(+)-4-異基-3-酰-2-惡唑烷酮微小隱孢子蟲病抗體
光帽鱗傘(滑菇) 1,1,1-三(羥甲基)乙烷乳脂
黑曲霉 (R)-(-)-2-苯肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移-Ⅰ
綠針假單胞 (S)-(+)-2-苯脂肪甘油三酯脂
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