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| 貨號 | FS-X10882 |
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中文名稱：CDK9，CDK8和CDK7抑制劑（LY2857785）
英文名稱：LY2857785
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10882
產(chǎn)品介紹:
LY2857785是一種I型可逆的ATP競爭性的CDK9，CDK8和CDK7抑制劑，IC50分別為11nM，16nM和246nM。 注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：1619903-54-6 純度：98.59% 分子量：448.6 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
布雷絲枝霉大鼠維生D2Anti-SH3RF3 Antibody人1(PRM1)
寄生曲霉小鼠神經(jīng)肽YAnti-SHC1 Antibody人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)
榆干側(cè)耳、大榆磨人抗Sc1-70抗體Anti-SH3TC1 Antibody人一氧化碳血紅蛋白(HbCO)
藤倉赤霉大鼠維生EAnti-SHANK2 Antibody人血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)
根霉人Jo1抗體/抗組酰tRNA合成抗體Anti-SHC2 Antibody人血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)
加德那氏鏈霉菌小鼠生長激釋放多肽Anti-SHC1 Antibody人血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)
谷棒桿菌大鼠維生AAnti-SHD Antibody人血小板相關(guān)補(bǔ)體3(PAC3)
圈卷產(chǎn)色鏈霉菌大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白Anti-SHLD2 Antibody人血栓A2(TX-A2)
新城疫病小鼠凝溶膠蛋白Anti-SHPK Antibody人血栓A2(TX-A2)
紅根須腹菌人抗核糖核蛋白抗體Anti-SIGLEC5 Antibody人血紅蛋白H(HbH)
膠孢人抗天然脫氧核糖核抗體Anti-SIGLEC7 Antibody人血紅蛋白H(HbH)
阪崎腸桿菌小鼠核因子κB受體活化因子配基Anti-SIK3 Antibody人血紅蛋白C(HbC)
枯草芽孢桿菌大鼠血小板因子4Anti-SIK3 Antibody人血紅蛋白C(HbC)
腐皮鐮孢菌小鼠血栓前體蛋白Anti-SIPA1 Antibody人纖維蛋白(Fibrin)
金龜子綠僵菌大鼠雙氫睪Anti-SIN3B Antibody人纖維蛋白(Fibrin)
桔橙鏈霉菌人抗可提取核抗原抗體Anti-SIRPG Antibody人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)
相關(guān)抗原57抗體雞樅(雞菌）AC-H12
TIP30蛋白抗體蘋果黑腐皮殼菌（斜面）ETMcAb4F11
跨膜和泛樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體厚環(huán)粘蓋牛肝菌2F11/A9
乳腺癌抗雌激抵抗蛋白2抗體金龜子綠僵菌（斜面）AhMcAb1F3
CDK9，CDK8和CDK7抑制劑（LY2857785）馬昆德擬青霉 2-氟-5-(三氟甲基)補(bǔ)體1q
大腸埃希氏 三氟磺銩華支睪吸蟲IgG抗體
灰黃鏈霉 4-氟-2-三氟甲囊尾蚴IgM
灰樹花 苯并-15-冠-5α半乳糖基抗原
蘑菇 乙酰肼β4
氨桿 2-基嘧啶甲型H3流感
光硬皮馬勃 1-甲基-4-氟-1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷二(四氟)鹽甲型H1N1流感
盤長孢狀盤孢 4-(叔辛基)硫氧還蛋白相互作用蛋白
釀酒酵母 4-羧基苯硫氧還蛋白
臭椿尾孢 乙酰酮鐵(III)髓觸發(fā)受體2
Halomonas 二苯硫O型口蹄疫抗體
球孢白僵 4,4-二氨基二苯硫外信號調(diào)節(jié)激
拉浩爾谷農(nóng)球 雙(三苯基膦)二化鈀(II)Ⅵ型膠原
棲熱屬 4-氨基二苯CD163分子
假根蘑菇 雙(三苯基膦)合化羰基銠(I)肝
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