PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鹿源性成分(Deer)核酸定性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10691
產(chǎn)品分類：PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
乳桿菌屬發(fā)酵制乳制品，青貯飼料，制作泡菜。模式菌株: no泡豬耳朵汁提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0006生長條件: 37℃

黑曲霉甘蔗糖蜜發(fā)酵檸檬。模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃

 -1403℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

假結(jié)核耶爾森氏菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0116提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no 真空冷凍干燥法

解脂耶羅威亞酵母共生微生物/魚類共生菌模式菌株: no生物樣/鰶 頭鰓提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃

玉蜀黍赤霉（麥類赤霉病菌）生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法

黑曲霉培養(yǎng)基: CM0013產(chǎn)檸檬。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 35℃ 礦物油法

ATCC8260研究、質(zhì)量控制模式菌株: no種屬: Clostridium│beijerinckii提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0121生長條件: 37℃

硬結(jié)節(jié)桿菌生長條件: 4℃培養(yǎng)基: 848土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 -1404℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

假絲酵母生長條件: 28-42℃培養(yǎng)基: 13側(cè)耳培養(yǎng)基提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 真空冷凍干燥法

鏈霉菌屬菌種抗金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌11、白色念珠菌、草分枝桿菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

CCM2589=CCUG50160=CCUG50354=CIP104400=DSM10241=IFO(nowNBRC)15472=JCM11608=VKMAc-1975模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Brachybacterium│conglomeratum水樣/油田鹽水（oil brine）提供形式: 凍干物模式菌株培養(yǎng)基: 471

蘇云金芽孢桿菌生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 2提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 其他

印度洋新鞘氨醇菌培養(yǎng)基: 745有機污染物降解菌/多環(huán)芳烴降解菌水樣/表層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 26℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 T.443936噬菌體分型用 Vi 36　　　9,12,Vi　d　-模式菌株: no種屬: Salmonella│typhi提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃

鳶尾苷元磺鈉ABCG1 peptide  三磷腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗原 抗黃熱病包膜糖蛋白IgG

異阿魏Cardiac Troponin T  心肌特異性肌鈣蛋白T 人、大、小鼠、羊、牛beta內(nèi)啡肽IgG

鹽水蘇堿BACE( ASP2 )   β分泌酶（抗原） 抗核苷內(nèi)焦磷酶/磷二酯酶1IgG

異槲皮素ABL1(v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1)  ABL1抗原 β4整合素結(jié)合蛋白IgG

延齡草苷FUCA1/Alpha L fucosidase I peptide  α-L巖藻糖苷酶抗原 抗脈管發(fā)育(組裝)蛋白IgG

鹽拓撲替康Rabbit IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記兔IgG(流式同型對照) 兔抗人、大、小鼠磷化表皮生長因子受體IgG

標(biāo)準(zhǔn)品Bassoon(BSN)  抗體

異龍腦Bax peptide  Bax（多肽抗原） 兔抗人、大、小鼠磷化表皮生長因子受體IgG

原阿片堿Leptin peptide/FITC  熒光素FITC標(biāo)記瘦素抗原 兔抗人、大、小鼠磷化表皮生長因子受體IgG

異香蘭素Bcl-2(抗原)  Bcl-2（多肽抗原） 兔抗人、大、小鼠磷化表皮生長因子受體IgG
鹿源性成分(Deer)核酸定性檢測試劑盒Etoposide　泊甙　質(zhì)量規(guī)格：>90%,羅氏分包

Etoposide　泊甙（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>90%,植物激素級

Exemestane　依西美坦（企標(biāo)）　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

ExenatideAcetate/Exendin-4　醋艾塞那肽　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Finasteride　非那雄胺　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Finasteride　非那雄胺（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Fleroxacin　氟羅沙星　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Fleroxacin　氟羅沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Flucytosine　氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Flucytosine　氟胞嘧啶/5-氟胞嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Flurbiprofen　氟比洛芬(國產(chǎn))　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Flurbiprofen　氟比洛芬(進口)　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

Flurbiprofen　氟比洛芬（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)(T)

FosfomycinCalcium　磷霉素鈣（水溶）　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(HPLC)

Fosfomycinsodium　磷霉素鈉　質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(HPLC)