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貨號	FS-X10337

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：IAP抑制劑(LCL161)

英文名稱：LCL161

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10337

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：LCL161

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

LCL161是一種IAP抑制劑，在HEK293細(xì)胞中，抑制XIAP活性，IC50為35nM，在MDA-MB-231細(xì)胞中，抑制cIAP1活性，IC50為0.4nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1005342-46-0

純度：99.17%

分子量：500.63

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

層出鐮孢原變種黑色瘤相關(guān)抗原B1抗體Human MTHFD1 Ⅱ(FⅡ)

立枯絲核菌微小染色體維持缺陷蛋白5抗體Human MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) 凝血原肽段1+2(F1+2)

榆黃蘑結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體Human CDK5(Cyclin-dependent kinase 5) 凝血原前體蛋白(PIVKA-II)

深色殼囊孢基質(zhì)金屬蛋白-1抗體Human MTHFD1L 凝血原片段F1+2(F1+2)

蟬花磷化肌增強因子2C抗體Human MTHFS 凝血原(PT)

水生黃桿菌磷化肌增強因子2抗體Human MTHFD1L 凝血血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物(T-TM)

皮生毛霉磷化髓鞘堿性蛋白抗體Human MTHFS 凝血受體(TR)

黑根霉磷化髓鞘堿性蛋白抗體Human MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) 凝血敏感蛋白1(TSP-1)

芽殖球菌屬磷化肌球蛋白輕鏈6抗體Human OAS2(2′-5′-oligoadenylate synthase 2) 凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)

孢小克銀漢霉輪生變種磷化p38MAPK抗體Human MRPL45 凝血(TM)

枯草芽胞桿菌磷化p38MAPK抗體Human NPPC(C-type natriuretic peptide) 凝血(Thrombin)

乳乳球菌葉蟬亞種磷化肌增強因子2C抗體Human TTR(Transthyretin) 凝溶膠蛋白(GS)

釀酒酵母磷化基末端激2抗體Human DSG1(Desmoglein-1) 凝溶膠蛋白(Gelsolin)

雜硅鹽礦物節(jié)桿菌蛋白激MPK38抗體Human MS4A6A 凝聚(CLU)

彎孢菌微粒體S轉(zhuǎn)移1抗體Human MPV17L 凝膠原蛋白(gelson)

枯草芽孢桿菌粘蛋白13抗體Human MPV17 尿腫瘤壞死因子相關(guān)誘導(dǎo)凋亡配體死亡受體4(TRAIL-DR4)

白地霉Geotrichum│candidum 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,美國進口膽

單核細(xì)胞增生李斯特菌Listeria│monocytogenes 質(zhì)量規(guī)格：>99%龍膽苦

豬鏈球菌Streptococcus│suis 質(zhì)量規(guī)格：0.99植
IAP抑制劑(LCL161)馬爾他布魯氏 3-氟鄰苯二甲酐反狀腺原

大腸埃希氏桿乙泛

傘形卷霉 3,6-二氟鄰苯二甲泛C末端水解L1

大腸埃希 4-氟苯甲酰乙甲酯芳香族L-氨基脫羧

土壤德沃斯氏 2-溴苯乙肥大類胰蛋白

居真細(xì) N,N′-二苯基-N,N′-(3-基)-1,1′-聯(lián)苯-4,4′-二肥胖抑制

Compostimonas 6-溴吡啶-2-頻哪酯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A

大腸埃希氏桿巰基七甘單甲肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B

諾卡氏二溴二二乙酯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C

矩圓黑盤孢溴氟甲基膦二乙酯肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D

銅綠假單胞 1-烯基-3-甲基化咪唑分泌成分

淀粉產(chǎn)色鏈霉 1-乙基-3-甲基化咪唑鎓分泌型卷曲相關(guān)蛋白1

Bacillus aryabhattai 1,3-二溴-5-(易)分泌型球蛋白A

猴頭 1-乙基-3-甲基咪唑溴鹽封閉蛋白1

黃曲霉 1-丁基-3-甲基化咪唑鎓復(fù)制蛋白A
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)