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貨號 | FS-X9830 |
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中文名稱:即用型DAPI染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:10ml|50ml
貨號:FS-X9830
產(chǎn)品介紹:
DAPI(4,6-Diamidino-2-phenylindole ,4,6-二氨基-2-苯基吲哚)是一種DNA 特異性染料,與DNA產(chǎn)生非嵌入式結(jié)合,發(fā)出藍(lán)色熒光。該染料對細(xì)胞膜有半通透性,可透過正?;罴?xì)胞產(chǎn)生較弱的藍(lán)色熒光(細(xì)胞固定后熒光增強),而凋亡細(xì)胞的膜通透性增加,對其攝取能力增強,產(chǎn)生很強藍(lán)光染色。 正常細(xì)胞的核形態(tài)呈圓形,邊緣清晰,染色均勻,而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核邊緣不規(guī)則,細(xì)胞核染色體濃集,著色較重,并伴有細(xì)胞核固縮,核小體碎片增加,因此從熒光強度及核形態(tài)均可鑒別出細(xì)胞發(fā)生凋亡的典型特征。 操作方法(本方法針對貼壁細(xì)胞,但不僅限于貼壁細(xì)胞) 1. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞爬片棄去培養(yǎng)基,10mM PBS,pH7.4,洗一次; 2. 再滴加入100μL 的DAPI 染液,室溫避光染色5-15 min; 3. 棄去染色液,PBS 漂洗一次, 4. 滴加甘油或Buffer A,熒光顯微鏡以340/380nm 紫外光激發(fā),500×(40×12.5)(好是100×油鏡頭)觀察、拍照。 儲存:2-8℃,避光,有效期6個月。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
AV-951英文名: Adenosine磷化鈣調(diào)磷B亞基B1抗體包裝5g
BGJ398(NVP-BGJ398)英文名: Adiphenine HCl羊毛甾14α-去基化蛋白抗體包裝5g
Carmustine(進(jìn)分)英文名: Adiphenine HCl補體C5抗體包裝1g
CEP-18770英文名: Alarelin Acetate5號染色體開放閱讀框24抗體包裝250mg
HSP990英文名: Alendronate Sodium5號染色體開放閱讀框42抗體包裝250mg
MK4827 (Niraparib)英文名: Alendronate Sodium5號染色體開放閱讀框49抗體包裝250mg
O-6-芐基鳥英文名: Allopurinol5號染色體開放閱讀框35抗體包裝1g
Ruxolitinib(INCB018424) pho...英文名: Allopurinol中心體蛋白192抗體包裝25g
SB431542,SB-431542英文名: Allylestrenol中心體蛋白27抗體包裝5g
TAE684英文名: Allylestrenol中心體蛋白290抗體包裝100g
Tamoxifen Citrate英文名: Alprostadil,PGE1,中心體蛋白63抗體包裝25g
Tariquidar,XR-9576英文名: Altrenogest中心體蛋白70/p10結(jié)合蛋白抗體包裝5g
阿法替尼英文名: Altrenogest中心體蛋白72抗體包裝1ml
阿法替尼雙馬來鹽英文名: Amantadine HCl中心體蛋白95抗體包裝25g
阿西替尼英文名: Amantadine HCl中心體蛋白89抗體包裝1g
: AS2.606資源名稱: 橢圓釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,三合物胰高血糖樣肽1試劑盒異綠原C;Isochlorogenic
豌豆根瘤菌Rhizobium│leguminosarum 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品,三合物胰高血糖試劑盒異綠原B;Isochlorogenic
拉曼小毛霉原變種Micromucor│ramarnianus 質(zhì)量規(guī)格:效價≥750IU/MG,BP,BR胰多肽試劑盒異綠原A;Isochlorogenic
即用型DAPI染色液楊奇青霉 1-苯基正癸烷血管生成樣蛋白8
沙諾氏芽孢桿 3-溴甲酯谷脫羧65抗體
幼角鐮孢 4-鄰苯二甲酰亞氨基環(huán)己酮谷脫羧65IgG抗體
黑色附球霉 3,5-二溴-4-硝基吡唑新型隱球抗原
大腸埃希 薄荷酮, mixture of isomers血管內(nèi)皮生長因子D
雅致枝霉 2-溴-3-氟三氟甲苯沙眼衣原體IgA抗體
谷棒桿 (S)-3-氨基四對甲苯磺鹽枸櫞
季也蒙邁耶氏酵母 2-氨基-2,4-二煙甲酯磷二酯9A
大孔 (R)-(+)-alpha-氨基-gamma-丁內(nèi)酯鹽鹽耐膽鹽
嗜麥芽寡養(yǎng)單胞 普羅帕脒整合αMβ2
黃色糖多孢 N-芐基-雙鄰乙基氨基鹽鹽整合αVβ5
居真細(xì)屬 洛韋微管相關(guān)蛋白輕鏈3II
少根根霉 3,5-二氟-4-甲氧基苯甲甲型肝炎抗原
纖維單胞 帕韋三水合物腫瘤蛋白p53
金黃桿 阿替美唑鹽鹽氧化低密度脂蛋白IgG抗體
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