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貨號(hào) | FS-X10924 |
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中文名稱:CDK抑制劑(PHA-793887)
英文名稱:PHA-793887
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10924
產(chǎn)品介紹:
PHA-793887是一種有效的,ATP競爭性的CDK抑制劑,可抑制Cdk2,Cdk1,Cdk4和Cdk9的活性,IC50值分別為8nM,60nM,62nM和138nM,同時(shí)可抑制糖原合酶激酶3β(GSK-3β),IC50值為79nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):718630-59-2 純度:98.33% 分子量:361.48 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
分枝節(jié)桿菌人己糖激3Talaromyces flavus小鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)
小毛克孢菌屬人血小板型磷果糖激Mycobacterium smegmatis小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)
畢赤酵母人尿二磷葡萄糖神經(jīng)酰葡萄糖基轉(zhuǎn)移Bacillus alcalophilus小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)
根瘤菌人凋亡相關(guān)半胱肽4Bacillus amyloliquefaciens小鼠溶菌(LZM)
大腸埃希氏菌人吡哆/吡哆維生B6激Bacillus amyloliquefaciens小鼠溶菌(LZM)
黏液鞘單胞菌人二氫嘧啶樣2Bacillus amyloliquefaciens小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)
慢生根瘤菌人血清/糖皮質(zhì)激調(diào)節(jié)激2Bacillus atrophaeus小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)
黃色籃狀菌人絲裂原活化蛋白激激6Bacillus amyloliquefaciens小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)
蠟狀芽孢桿菌人吡哆/吡哆維生B6磷Bacillus amyloliquefaciens小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)
釀酒酵母人T特異性鳥三磷Bacillus badius小鼠垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)
腸膜明串珠葡萄聚糖亞種人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移1Bacillus badius小鼠垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)
印度洋鏈霉菌人D-乳脫氫Bacillus badius小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
釀酒酵母人α1抗Bacillus badius小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
韓國污泥單胞菌人激肽釋放1Bacillus benzoevorans小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)
黃溶鏈霉菌人激肽釋放6Bacillus carboniphilus小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)
杰氏假單胞菌人磷化乙酰Acetobacter aceti小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)
信號(hào)通路Wnt4抗體蘇云金芽孢桿菌巴西亞種樹鼩胎皮膚成纖維樣細(xì)胞
信號(hào)通路Wnt6抗體蘇云金芽孢桿菌喀麥亞種幼蚊細(xì)胞
Verprolin同源結(jié)構(gòu)域包含蛋白3抗體蘇云金芽孢桿菌高麗亞種大鼠腎小球系膜細(xì)胞
富含脯同源蛋白1抗體蘇云金芽孢桿菌貴陽亞種小鼠小腦星形細(xì)胞
CDK抑制劑(PHA-793887)解淀粉周培瑾氏 美替拉酮C-Raf原癌基因絲蘇蛋白激
黃孢鏈霉 對乙烯基愈瘡木性磷
黑線 雌馬堿性磷
異常威克漢姆酵母 硅膠谷轉(zhuǎn)氨
孢小克銀漢霉輪生變種 硅膠谷草轉(zhuǎn)氨
釀酒酵母 硅膠卵黃蛋白原
枯草芽孢桿 硅膠總抗氧化能力
出芽短梗霉 硅膠錨蛋白
類馬鏈球 原色硅膠過氧化物還原
釀酒酵母 變色硅膠腫瘤壞死因子α
多主葡萄殼 1,2-二氫-2-異丁氧基喹啉-1-甲異丁酯白介1
噬幾丁質(zhì)屬 1,5-戊二白介6
大麗輪枝孢 1,1'-羰基二吡咯γ干擾
黃曲霉 三(二甲基氨基)磷六氟磷鹽脂蛋白脂
海球 四乙二二對甲苯磺酯肝脂
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