當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> TMEM16A chloride通道抑制劑(Shikonin)
貨號 | FS-X10673 |
---|
中文名稱:TMEM16A chloride通道抑制劑(Shikonin)
英文名稱:Shikonin
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10673
產(chǎn)品介紹:
Shikonin是一個(gè)TMEM16A chloride通道的抑制劑,IC50值是6.5uM.。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:517-89-5 別名:C.I.75535;Isoarnebin 4 純度:99.64% 分子量:288.3 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
平臍蠕孢菌血管緊張1轉(zhuǎn)換抑制劑(抗原)Anti-AJUBA Antibody半乳糖凝集7B(GAL7B)
球形阜孢ACINUS 多肽抗原Anti-AK5 Antibody半乳糖凝集7(GAL7)
谷棒桿菌小鼠IgAAnti-AKAP11 Antibody半乳糖激2(GALK2)
匍枝根霉原變種(可訂購)促腎上腺皮質(zhì)激(7-23)(抗原)Anti-AK6 Antibody半乳糖激1(GALK1)
枯草芽孢桿菌肌動(dòng)蛋白(抗原)Anti-AKAP1 Antibody半乳糖β(GLβ)
枯草芽孢桿菌人血清白蛋白標(biāo)記生物Anti-AKAP14 Antibody半乳糖α(GLα)
棕褐橙鏈霉菌粒-巨噬集落激因子3抗原Anti-AKAP17A Antibody半乳糖變旋(GALM)
銀色鏈霉菌肺表面活性蛋白B抗原Anti-AKAP13 Antibody半乳糖-3-O-磺基轉(zhuǎn)移4(GAL3ST4)
韓國游動(dòng)微菌陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1Anti-AKAP5 Antibody半乳糖-3-O-磺基轉(zhuǎn)移3(GAL3ST3)
克里布所島津氏菌基質(zhì)金屬蛋白-9(抗原)Anti-AKIP1 Antibody半乳糖-3-O-磺基轉(zhuǎn)移2(GAL3ST2)
黑曲霉晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體(抗原)Anti-AKIP1 Antibody半乳糖-3-O-磺基轉(zhuǎn)移1(GAL3ST1)
地芽孢桿菌屬14-3-3 蛋白(多肽抗原)Anti-AKR1C8P Antibody半乳凝8(GAL8)
棉毛狀嗜熱霉植物14-3-3蛋白抗原Anti-AKR1C8P Antibody半乳凝4(GAL4)
栗色針孔菌FRA-1多肽蛋白Anti-AKR1E2 Antibody半乳凝2(GAL2)
毛柄金錢菌(金針菇)調(diào)亡誘導(dǎo)因子(多肽片斷抗原)Anti-AKT1 Antibody半乳凝14(GAL14)
抗輻射不動(dòng)桿菌腺激-1Anti-ALB Antibody半乳凝12(GAL12)
孕激受體βMPRβ抗體Pseudozymaantarctica大鼠內(nèi)臟脂肪組織提取物
前列腺F2a受體抗體PGF2αR新生隱球菌大鼠胎兒表皮組織提取物
神經(jīng)叢蛋白B3抗體東方伊薩酵母大鼠皮下脂肪組織提取物
絲/蘇蛋白激PCTK2抗體季也蒙念珠菌大鼠表皮組織提取物
TMEM16A chloride通道抑制劑(Shikonin)奧氏蜜環(huán) 二苯基膦戊型肝炎病IgG抗體
中慢生根瘤屬 1-金剛烷羧戊型肝炎病IgM抗體
4-氟-3-甲氧基流行熱病抗體
異常畢赤酵母 1,4-二甲氧基-2-氟苯口蹄疫O型
蘇云金芽孢桿 4-(三氟甲氧基)球蛋白G抗體
豬丹絲 環(huán)己基苯組蛋白H3
兔出血癥病 N-乙基-N-(3-磺基)苯鈉鹽(ALPS)腸激
灰葡萄孢(灰霉?。?/span> 1-氨基蒽醌乙腦病抗體
膠孢 1-蒽醌肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白a
炭疽芽胞桿 1-(甲氨基)蒽醌肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白b
無色柱頂孢 2-環(huán)己酮肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白c
芳香鐮孢 (S)-(-)-1-甲基-2-(1-萘氨基)吡咯烷
尤氏泰勒蟲(臨洮株-2) 雙(2-乙基)鹽鹽偽狂犬病
大腸埃希 十四烷二髓過氧化物
葡萄座腔 1,4-二-2-丁炔腺代琥珀合成
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),儀表網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。