CK2抑制劑(CX-4945)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10336

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：CK2抑制劑(CX-4945)

英文名稱：CX-4945

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10336

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：CX-4945

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

CX-4945是一種高效的，具有選擇性的CK2抑制劑，對CK2α和CK2α的IC50值均為1nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1009820-21-6

別名：Silmitasertib

純度：98.08%

分子量：349.77

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Xanthomonas gardneri遷移誘導(dǎo)因子5抗體Human Napsin A 偶聯(lián)因子6(CF6)

類干酪乳桿菌類干酪亞種致癌基因抗體Human Napsin A 紐蛋白(VCL)

蠟狀芽孢桿菌絲裂原活化蛋白激MAP4K5抗體Human MYBBP1A(Myb-binding protein 1A) 牛小腸堿性磷(CIAP)

煙曲霉MKLN1抗體Human MYBPC1 牛兒基焦磷合(GGPS1)

禽勞斯肉瘤病絲裂原活化蛋白激相互作用蛋白1抗體Human TLR4(Toll-like receptor 4) XIIIB鏈(F13B)

產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型MPP2蛋白抗體Human MYCL1 XIII A1(F13A1)

木霉發(fā)育相關(guān)蛋白抗體Human MTHFD1 VIII(FVⅢ)

枝孢屬MS4A15蛋白抗體Human MTHFD1L Ⅻ(FⅫ)

香菇四度跨膜蛋白3抗體Human MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) ⅩⅢ(FⅩⅢ)

謝瓦曲霉黑色瘤相關(guān)抗原12抗體Human CDK5(Cyclin-dependent kinase 5) Ⅹ(FⅩ)

南世宗菌黑色瘤相關(guān)抗原2抗體Human MTHFS Ⅸ(FⅨ)

傳染性法氏囊病病黑色瘤相關(guān)抗原5抗體Human MX1(Myxovirus Resistance 1) Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)

化妝品（陽性）同源盒基因Msx2抗體Human MSI2 Ⅷ(FⅧ)

葡萄座腔菌磷化雙微體2癌基因抗體Human PROC(Vitamin K-dependent protein C) Ⅶ(FⅦ)

產(chǎn)氣莢膜梭菌 A型磷化雙微體2癌基因抗體Human MSK1 Ⅴ(FⅤ)

嗜鹽動性球菌三聚單克抗體Human PROZ(Vitamin K-dependent protein Z) Ⅲ(FⅢ)

嗜鹽潮間帶桿菌Aestuariibacter│halophilus 質(zhì)量規(guī)格：>98%芝麻

乳桿菌Lactobacillus│ 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR去氧膽

腸膜明串珠菌腸膜亞種Leuconostoc│mesenteroidessubsp.mesenteroides 質(zhì)量規(guī)格：>97%,進(jìn)分TCI A2215豬去氧膽
CK2抑制劑(CX-4945)鏈霉屬 2-甲氧基-5-硝基三氟甲苯多巴-β羥化

枯草芽孢桿鹽萘替芬多巴脫羧

侵蝕侏儒囊 1,3-二甲基咪唑鎓二甲基磷酯多巴轉(zhuǎn)運蛋白

釀酒酵母 3,4-二甲氧基苯多聚ADP核糖聚合

地衣芽孢桿 2,6-二氟苯乙多聚ADP核糖聚合-1

枯草芽孢桿貝他定鹽多聚組標(biāo)簽

蜂房類芽孢桿 4-（4-基環(huán)己基）多配體蛋白聚糖1

紅法夫酵母硫代酰多肽YY

Citricoccus 1-丁基-4-溴鹽兒茶

根瘤屬三苯甲基-(R)-縮水甘油兒茶氧位甲基轉(zhuǎn)移

沙針擬盤多毛孢苯并噻吩-2-羧兒茶抑

傘假單胞 (R)-(-)-6,6'-二溴-1,1'-聯(lián)-2-萘二氧化

釀酒酵母甲磺妥拉明二磷腺

枯草芽孢桿枯草亞種 2-異煙二肽基肽Ⅳ

炭黑曲霉 (-)-二特戊酰-L-甘油二酯
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)