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貨號 | FS-X10725 |
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產(chǎn)品介紹:
GSK429286A是選擇性的ROCK1和ROCK2抑制劑,IC50值為14nM和63nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:864082-47-3 純度:99.13% 分子量:432.37 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:ROCK1和ROCK2抑制劑(GSK429286A)
英文名稱:GSK429286A
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10725
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
馬葡萄球菌腦腸肽28Anti-DGKB Antibody人堿性成纖維生長因子4(bFGF-4)
瑟氏泰勒蟲(盧氏株-2)咬合蛋白抗原Anti-DGKD Antibody人堿性成纖維生長因子4(bFGF-4)
枯草芽孢桿菌胚胎干關(guān)鍵蛋白抗原Anti-DGKE Antibody人性成纖維生長因子1(aFGF-1)
糞腸球菌鳥脫羧抗原Anti-DGKI Antibody人性成纖維生長因子1(aFGF-1)
大腸埃希菌小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌膜通道蛋白抗原Anti-DGKH Antibody人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)
玫瑰庫克氏菌嗅球蛋白1多肽抗原Anti-DGKB Antibody人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)
杰丁畢赤酵母增食欲-A/欲激A抗原Anti-DGKZ Antibody人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)
季也蒙有孢漢遜酵母縮宮受體Anti-DHPS Antibody人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)
異常威克漢姆酵母食欲受體(多肽)Anti-DHPS Antibody人E選擇(E-Selectin/CD62E)
蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種增殖潛能相關(guān)蛋白抗原Anti-DGKK Antibody人E選擇(E-Selectin/CD62E)
費(fèi)雷生枝霉p19ARF抑癌基因抗原Anti-DHRS11 Antibody人嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)
乳酒假絲酵母磷化絲裂原活化蛋白激p38抗原Anti-DHRS4 Antibody人嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)
大腸埃希氏桿菌絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗原Anti-DHX8 Antibody人鼠嗜粒趨化因子(ECF)
抗生鏈霉菌腫瘤抑制基因抗原(野生型P53)Anti-DHX8 Antibody人鼠嗜粒趨化因子(ECF)
糞腸球菌突變型P53抗原Anti-DIABLO Antibody人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)
尖孢鐮刀菌野生型p53誘導(dǎo)基因1抗原Anti-DIAPH2 Antibody人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)
ATP受體抗體匍枝根霉人前列腺增生細(xì)胞
磷脂酰肌激催化亞單位A抗體聚多曲霉(薩氏曲霉)人胚腎細(xì)胞
蛋白體激活因子PA28γ抗體鏈格孢小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
前列腺E2受體2抗體根霉小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞
ROCK1和ROCK2抑制劑(GSK429286A)摩氏摩根 2-氟苯酮V
葡萄座腔 4-氟-3-硝苯Ⅶ
華根霉 4-氟-2-硝苯Ⅷ
乙假絲酵母 4-氟-2-甲Ⅸ
水生拉恩氏 甲-4-硝基芐酯Ⅹ
根瘤 2-氨基-5-三氟甲苯流感病抗體
解蛋白弧 2-溴-4,6-二氟苯流感病H3N2亞型
Lonsdalea quercina subsp. quercina 2-氟-1,3-二甲苯新孢子蟲病抗體
德曼鏈霉 3-氟-1,2-二甲苯血管舒緩激肽
康寧木霉 二糠基二硫α平滑肌肌動蛋白
橄欖色青霉 紅白介31
巴氏醋桿 正丁基解脲支原體抗體
盤孢屬 1,3,5-苯酰總膽汁
香菇 α-安息香肟膽汁
泡盛曲霉 呋喃-3-甲鉤端螺旋體
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