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貨號(hào)	FS-X10672

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：BRAF抑制劑(PLX7904)

英文名稱：PLX7904

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10672

產(chǎn)品介紹:

PLX7904是有效的，選擇性的BRAF抑制劑，在表達(dá)突變體RAS的細(xì)胞中，對(duì)BRAFV600E的IC50值約為5nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1393465-84-3

純度：98.15%

分子量：512.53

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

日本玉蕈球蛋白抗原Anti-AFF1 Antibody胞漿磷蛋白3(STMN3)

枯斑擬盤多毛孢蛋白激活受體-2桔抗肽Anti-AGAP2 Antibody胞漿磷蛋白2(STMN2)

側(cè)柄褐孔菌末梢同源匡基因多肽片段Anti-AGBL2 Antibody胞漿磷蛋白1(STMN1)

桃紅平菇?？窠?jīng)（35肽）Anti-AGBL4 Antibody胞漿抗蛋白水解3(CAP3)

枯草芽孢桿菌?？窠?jīng)（35肽）Anti-AGBL2 Antibody胞漿抗蛋白水解2(CAP2)

莫哈韋芽孢桿菌?？窠?jīng)（35肽）Anti-AGPAT3 Antibody胞漿多聚A結(jié)合蛋白1樣蛋白(PABPC1L)

釀酒酵母海葵神經(jīng)（35肽）Anti-AGBL3 Antibody胞漿-5',3'-核(NT5C)

水叢毛單胞菌?？窠?jīng)（35肽）Anti-AGPAT5 Antibody胞脫(CDA)

茯苓?？窠?jīng)（35肽）Anti-AIF1 Antibody伴肌動(dòng)蛋白(NEB)

白淺灰鏈霉菌重組乙肝病核心抗原Anti-AHSP Antibody伴刀豆球蛋白A(ConA)

殼菌重組乙肝病e抗原Anti-AIF1 Antibody半椎蛋白2(HMCN2)

乳乳球菌乳亞種重組人登革熱病2型診斷抗原Anti-AGR3 Antibody半椎蛋白1(HMCN1)

黑曲霉重組豬水腫蛋白Anti-AICDA Antibody半乳糖神經(jīng)酰(GALC)

產(chǎn)克雷伯氏菌腎上腺髓質(zhì)（22-52）Anti-AIFM2 Antibody半乳糖凝集9C(GAL9C)

尖鐮孢腎上腺髓質(zhì)（22-42）Anti-AIG1 Antibody半乳糖凝集9B(GAL9B)

彎孢菌α-1抗(抗原）Anti-AIRE Antibody半乳糖凝集9(GAL9)

細(xì)胞中心粒蛋白抗體吸水鏈霉菌奧薩霉亞種大鼠膀胱組織提取物

PSF2蛋白抗體涇陽鏈霉菌大鼠腎小球組織提取物

腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常同源蛋白抗體沙鏈霉菌大鼠冠狀動(dòng)脈組織提取物

蛋白調(diào)解因子6抗體羅倫隱球酵母大鼠牙乳頭組織提取物
BRAF抑制劑(PLX7904)嗜碳芽孢桿雙烯雌α-

蝙蝠蛾擬青霉鄰三聯(lián)苯維生B2

細(xì)鏈格孢菲醌煙酰

葡萄座腔異丁基病性腹瀉抗體

傳染性喉氣管炎病 (R)-2-(甲氧甲基)吡咯烷副結(jié)核分支桿抗體

美味側(cè)耳 5,7-二-8-羥基喹啉口蹄疫O型抗體

馬賽 2,2-二(3-氨基-4-羥苯基)六氟烷口蹄疫I型抗體

漢遜德巴利酵母漢遜變種 1-氨基-5-萘蓋他病抗體

果生鏈核盤 6--2-硝苯四環(huán)類

球毛殼 2,6-二苯甲β-內(nèi)酰

小馬勃 1-二氫茚酮谷轉(zhuǎn)氨

炭黑曲霉五氟苯磺酰淀粉

類干酪乳桿 4-苯氧基纖維

盤孢 N,N-二苯基甲酰乳糖

屎腸球乙對(duì)酯游離血紅蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)