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貨號	FS-X10671

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Notch抑制劑(LY3039478)

英文名稱：LY3039478

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10671

產(chǎn)品介紹:

LY3039478是一個(gè)新的和強(qiáng)的Notch抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1421438-81-4

純度：98.01%

分子量：464.44

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

鴨星狀病亮抑肽Anti-ADGRG5 Antibody胞外5'-核(NT5E)

弗里克塞爾湖黃桿菌促胃泌釋放肽（抗原）Anti-ADGRF5 Antibody胞裂蛋白9(SEPT9)

產(chǎn)黃纖維單胞菌牛血清白蛋白（標(biāo)準(zhǔn)）Anti-ADGRG1 Antibody胞裂蛋白8(SEPT8)

果蔬汁 op'-DDT、六六六髓鞘堿性蛋白(多肽）大鼠Anti-ADGRG5 Antibody胞裂蛋白7(SEPT7)

紫色紅曲菌血管活性腸肽Anti-ADGRG6 Antibody胞裂蛋白6(SEPT6)

尖孢鐮刀菌神經(jīng)節(jié)肽Anti-ADGRL2 Antibody胞裂蛋白5(SEPT5)

黃硬皮馬勃胰高血糖樣肽-2蛋白Anti-ADGRL1 Antibody胞裂蛋白4(SEPT4)

腸膜明串珠菌活性依賴的神經(jīng)保護(hù)肽(抗原）Anti-ADGRL4 Antibody胞裂蛋白3(SEPT3)

Corallococcus sp.α-1抗胰糜蛋白Anti-ADI1 Antibody胞裂蛋白2(SEPT2)

畢赤酵母胰糜蛋白Anti-ADPGK Antibody胞裂蛋白14(SEPT14)

呂氏泰勒蟲（渭源株）促腎上腺皮質(zhì)激（18-39）(抗原)Anti-ADNP Antibody胞裂蛋白13(SEPT13)

孟氏假單胞菌腦腸肽(一種新的生長激釋放肽)多肽抗原Anti-ADM Antibody胞裂蛋白12(SEPT12)

默氏利斯特氏菌胃泌/蛙皮（多肽人源）Anti-ADRA1D Antibody胞裂蛋白11(SEPT11)

枯草芽孢桿菌外周髓鞘蛋白0(P0蛋白)多肽抗原Anti-ADRA2C Antibody胞裂蛋白10(SEPT10)

釀酒酵母牛胰島蛋白Anti-ADRA2B Antibody胞裂蛋白1(SEPT1)

匍匐曲霉蛋白激活受體-2激活肽Anti-AF4 Antibody胞漿磷蛋白4(STMN4)

PEST含核蛋白抗體昆明鏈霉菌大鼠腎足突基底膜組織提取物

絲/蘇蛋白激18珊瑚鏈霉菌大鼠腎組織提取物

PELO蛋白抗體抗輻射鏈霉菌大鼠腎動(dòng)脈組織提取物

缺陷性分配同源物β抗體登佐鏈霉菌大鼠前列腺組織提取物
Notch抑制劑(LY3039478)枯草芽孢桿二苯乙肉堿脂酰轉(zhuǎn)移1

川黃桿 (S)-3-羥基四溶血磷脂

畢赤酵母屬 FMOC-L-五氟苯酯Re7抗原

傳染性支氣管炎病鄰甲氨基甲酯β-乳球蛋白

解橡膠諾卡氏鄰苯二甲丁芐酯血紅蛋白

糙皮側(cè)耳三(4-甲氧苯基)膦因子

乳酒假絲酵母 (-)二異松蒎基烷白介17

鞘脂 3-氨基-4-甲基噻吩-2-甲甲酯支原體

黃曲霉 1-萘-5-磺醋甲孕酮

嗜湖短芽胞桿鄰苯二甲二丁酯流行性出血熱抗原

香栓孔鄰苯二甲二丁酯大腸桿特異性抗體

Megamonas funiformis 2-甲基蒽醌維生D

多粘類芽孢桿 (S)-(-)-1-甲基-2-(1-基)吡咯烷維生E

中國臺灣根霉芴甲氧羰酰25羥基維生D

堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 2--4-氟苯甲視黃

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)