NEDD8活化酶抑制劑(MLN4924)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10256

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：NEDD8活化酶抑制劑(MLN4924)

英文名稱：NEDD8-activating enzyme inhibitor

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10256

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：NEDD8-activating enzyme inhibitor

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

MLN4924是一種有效的選擇性NEDD8活化酶(NEDD8-activating enzyme，NAE)抑制劑，IC50為4.7nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：905579-51-3

別名：Pevonedistat

純度：98.00%

分子量：443.52

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

嗜鹽四聯(lián)球菌磷化組蛋白H3抗體Human SCN10A 鮭魚補(bǔ)體蛋白3(C3)免疫試劑盒

谷棒狀桿菌（黃色短桿菌）*磷化組蛋白H3抗體Human SCML2 狗

大腸埃希菌磷化組蛋白H3抗體Human SCARA5 狗微管相關(guān)蛋白tau(MAPT)免疫試劑盒

福山假絲酵母組蛋白去乙?；?/span>5抗體Human SCN2B 狗基乙酰,delta-脫水(ALAD)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌A型流感病H5N1凝集Human SCARF1 狗15 - 基-13,14-二氫前列腺F2α(15-keto-13,14-dihydro-PGF2α)免疫試劑盒

橙色桿狀菌人巨病UL49蛋白抗體Human MUC15(Mucin-15)

褐球固氮菌*肝核因子1β/HNF-1β抗體Human SCCPDH 脂聯(lián)(ADP)免疫試劑盒

埃切畢赤酵母HHLA3蛋白抗體Human SART1 胃泌(Gastrin)免疫試劑盒

球孢白僵菌HHIP樣蛋白2抗體Human SCEL 胃動(dòng)(MTL)免疫試劑盒

多分枝靈芝A型流感病H3N2-M2蛋白抗體Human SART3 白蛋白(Albumin)免疫試劑盒

植物乳桿菌HSH2D抗體Human SAT2 5羥色(5-HT)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌水蛭抗體Human SAMM50 鵝

犁黑輪斑交鏈孢霉白抗原A抗體Human SASS6 鵝維生D3(VD3)免疫試劑盒

季也蒙邁耶氏酵母人瘤病16型E7抗體Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) 鵝降鈣(CT)免疫試劑盒

空腸彎曲桿菌人類狀瘤病58 E6蛋白抗體Human SATB1 鵝骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

宇佐美曲霉人類狀瘤病16抗體Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) 鵝鈣結(jié)合蛋白(CR)免疫試劑盒

毛殼菌Chaetomium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%橙黃決明

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品光甘草定

: SK1061/61資源名稱: 喬德普爾沙門氏菌質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%鹽石蒜堿
NEDD8活化酶抑制劑(MLN4924)短桿狀馬賽 1,3,5-三(4-溴苯基)苯膜結(jié)合型前列腺E合成1

西奈青霉 4-(三氟甲基)環(huán)己酮磷化P38蛋白

抗輻射鏈霉順式環(huán)己-1,2-二甲酰亞磷化c-jun氨基末端蛋白激

哈茨木霉 4-羥基-2,6-二甲R(shí)NA聚合轉(zhuǎn)錄終止因子Ⅰ

松鼠葡萄球松鼠亞種 2-溴肉桂維甲

紅色紅曲霉 3--2-甲Ca-Mg-ATP

根瘤 4--2-甲黃體生成受體

大豆慢生根瘤 2-萘乙白介17D

黑腐皮殼 L-精硝鹽基質(zhì)γ羧基谷蛋白

中華根瘤 6--5-氮雜Ⅰ型膠原C端肽β特殊序列

解淀粉芽孢桿解淀粉亞種三(三氟磺)鋁鈣調(diào)

竹喙球 2--1,1,1-氧基乙烷α酮戊二

猴頭菇 8-溴甲基喹啉雌酮

鏈格孢 3-甲三鹽脫氫表雄酮硫酯

釀酒酵母丁酰乳丁酯聚(ADP核糖)聚合1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)