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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>抑制劑激活劑>> BMPI型受體激酶抑制劑(LDN193189)
| 貨號 | FS-X10428 |
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產品介紹:
英文名稱：LDN193189 產品規(guī)格：2mg|5mg|10mg|50mg LDN193189是一種選擇性的BMPI型受體激酶抑制劑，抑制ALK2和ALK3的活性，IC50值分別為5nM和30nM；對ALK4，ALK5和ALK7的IC50值均≥500nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：1062368-24-4 別名：DM-3189 純度：99.40% 分子量：406.48 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
英文名稱：LDN193189
產品規(guī)格：2mg|5mg|10mg|50mg
貨號：FS-X10428
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
尖孢隔指孢磷化蛋白激C(T500)抗體Anti-CAPN1 AntibodyS100蛋白(S-100)
根際鏈霉菌磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CARD4/NOD1 AntibodyS-100B蛋白(S-100B)
葡萄球菌磷化p21激活激1抗體Anti-Carbonic Anhydrase 13/CA13 AntibodyS100B蛋白(S-100B)
黑曲霉磷化p21激活激2抗體Anti-CARD9 AntibodyRNA結合蛋白FUS(FUS/TLS)
靈芝(紅芝, 赤芝)磷化p21激活激3抗體Anti-Cardiotrophin1(CT-1) AntibodyRho家族GTP1(RND1)
釀酒酵母磷化p21激活激1/2/3抗體Anti-CARM1 AntibodyRho關聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激2(Rock-2)
毛柄金錢菌(金針菇)磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-P1(P10) AntibodyRho GDP解離抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)
聚貪噬菌內分泌腺衍生血管內皮生長因子抗體Anti-P1(P20) AntibodyREST協(xié)阻抑因子3(RCOR3)
蠟狀芽孢桿菌蛋白激樣內質網激抗體Anti-CARS Antibodyras同源物基因家族成員b(RHOB)
腸膜明串珠菌前列腺特異膜抗原抗體Anti-P1(P20) AntibodyP選擇糖蛋白配體1(PSGL-1)
假單胞菌磷脂酰肌激抗體Anti-P10 AntibodyP選擇(P-Selectin/CD62P/GMP140)
灰平鏈霉菌胎盤生長因子抗體Anti-P12 AntibodyP選擇(P-Selectin/CD62P)
污黑腐皮殼蛋白激A抗體Anti-P14(P10) AntibodyP選擇(P-Selectin)
死亡谷芽孢桿菌蛋白激C beta 1/2抗體Anti-P2 AntibodyP物質受體(SP-R)
豆芽菌胎盤生長因子抗體Anti-P2(P12) AntibodyP物質(SP)
禾谷胎盤生長因子抗體Anti-P2(small) AntibodyP糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)
病毒Influenzavirus A│Avian influenza virus 質量規(guī)格：純度98%,BR
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規(guī)格：>99%,選擇性p110δ抑制劑
杏鮑菇Pleurotus│eryngii 質量規(guī)格：98%,BR
BMPI型受體激酶抑制劑(LDN193189)稻梨孢 2,5-二甲氧基-β-乙烯總巰基
玫煙色棒束孢 3-氟-4-吡啶甲硝基還原
香菇屬 6-氟-2-吡啶甲羥甲基戊二單酰
海綿假單胞 3-甲基-1H-吡唑-5-甲淀粉
水稻腸桿 4-硝基三氟甲苯磷核糖焦磷
阿利坎特港富鹽 3-羥基苯硫血管內皮生長因子受體3
曲霉 4-(三氟甲基)血管內皮生長因子D
Thermobifida Tris-(2-cyanoethyl)phophine神經絲蛋白H磷化亞型
耐賴芽孢桿 2-基硅乙炔基噻吩心肌肌漿網鈣泵
釀酒酵母 氫氧化鋇水合物維生K1
光滑青霉 L-鳥甲酯凝集
嗜熱鏈球 4-(三氟甲基硫代)苯甲組織多肽特異性抗原
pBV220 2--4-甲糖類抗原19-9
黃柄曲霉 2--4-甲糖類抗原12－5
紅細 3,5-二硝基三氟甲苯糖類抗原15－3
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