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貨號(hào) | FS-X10927 |
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中文名稱:Aurora B和C抑制劑(GSK1070916)
英文名稱:GSK-1070916
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10927
產(chǎn)品介紹:
GSK1070916是可逆的ATP競爭性Aurora B和C抑制劑,IC50分別為3.5nM和6.5nM。而對于Aurora A-TPX2復(fù)合物的IC50則為490nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):942918-07-2 別名:GSK-1070916A 純度:99.55% 分子量:507.63 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
蕈青霉人絲/蘇蛋白磷Bacillus cereus小鼠活化A(ACV-A)
竹黃*人白介受體相關(guān)激Bacillus cereus小鼠抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)
匍枝根霉原變種人尿激Bacillus cereus小鼠抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)
畢赤酵母屬人磷烯式羧激Bacillus cereus小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)
日本裂殖酵母人Bacillus cereus小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)
灰離褶傘人β位淀粉樣前體蛋白裂解1Bacillus cereus小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)
鉛色灰球菌人蛋白二硫化物異構(gòu)前體Bacillus cereus小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)
涼山蟲草人蛋白二硫化物異構(gòu)A3Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)
彩色豆馬勃人山梨脫氫Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)
塊菌屬*人肽基脯酰順反異構(gòu)Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)
硫藤黃鏈霉菌人鳥酰轉(zhuǎn)移Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)
PCP20人內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)
大豆慢生根瘤菌人蛋白磷Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)
立枯絲核菌人硫氧還蛋白還原Bacillus cereus小鼠堿性磷(ALP)
Patulibacter ginsengiterrae人白彈性蛋白Bacillus cereus小鼠堿性磷(ALP)
果仁小叢殼菌人彈性蛋白Bacillus cereus小鼠血管生成4(ANG-4)
p21調(diào)控蛋白WISP39抗體假蜜環(huán)菌(亮菌)敘利亞倉鼠腎細(xì)胞
糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體血紅鉚釘菇(又名松傘菌)人胰腺星狀細(xì)胞
原癌基因WIP1抗體#雞腿菇C0394人粘液表皮樣癌細(xì)胞
WD重復(fù)膜蛋白19抗體cc 998(雞腿菇)/人胚肺成纖維細(xì)胞
Aurora B和C抑制劑(GSK1070916)腫塊芽孢桿屬 金、鈀、鉑、銥、釕/Au, Pd, Pt, Ir, Ru磷脂A2
金黃殼囊孢 鋯、鉿、鎢、鉬、鉭、鈮、鈦/Zr, Hf, W, Mo, Ta, Nb, Ti腺單磷脫氨
根霉 鋁、砷,、鋇、鈹、鉍、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、鎵、鋰、鎂、錳、鎳、鉛、銻、錫、鍶、鈦、、釩、鋅/Al肉堿脂酰轉(zhuǎn)移
牛蛙假絲酵母 鋁、砷、鋇、鈹、鉍、鎘、鈷、鉻、銅、鐵、鎂、錳、鎳、銻、錫、鈦、釩、鋅、鋯/Al, As, Ba,肉堿脂酰轉(zhuǎn)移
圖拉爾正青霉 砷、銻、鉍、鉛、錫、鎘/As, Sb, Bi, Pb, Sn, Cd脂肪合成
棕黑腐質(zhì)霉 2,6-二甲氧基脂肪合成
季也蒙邁耶氏酵母 順-9-二十三烯肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移-Ⅰ
固氮 辛可尼丁胃蛋白
樹脂殼 4-氟-3-苯胰蛋白
黃桿屬 聚四氟乙烯樹脂淀粉
云南木霉 二基基烯酰脂肪
蠟葉曲霉 異戊烯基溴磷脂A2
pET-39b 鈉磷脂C
假單胞屬 磷脂D
乳桿屬 苯甲硫磷脂A1
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