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貨號 | FS-X10476 |
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中文名稱:DNA拓撲異構酶I抑制劑(Campathecin)
英文名稱:Campathecin
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|100mg|500mg
貨號:FS-X10476
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Campathecin 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|100mg|500mg Campathecin是一種有效的DNA酶topoisomerase I的抑制劑,在乳腺癌MDA-MB-231細胞中,IC50和IC70值分別為50nM和0.225μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:7689-03-4 別名:(S)-(+)-Camptothecin;CPT 純度:98.26% 分子量:348.35 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
Corynebacterium urealyticum RAS蛋白樣激活劑1抗體Anti-EIF4A1 Antibody異染色質(zhì)蛋白1(HP1)
中慢生華癸根瘤菌Ras相關結(jié)構域蛋白質(zhì)2抗體Anti-ELANE Antibody異檸檬脫氫2(IDH2)
殺鮭氣單胞菌抑癌基因PDLIM4抗體Anti-EIF4A2 Antibody(PB0807)異檸檬脫氫1(IDH1)
糙孢籃狀菌RAS抑制蛋白1抗體Anti-EIF4G1 Antibody異連蛋白β(DTNβ)
彎孢周期D相關蛋白抗體Anti-EIF6 Antibody(PB0611)異連蛋白α(DTNα)
谷棒桿菌Rho家族GTP3抗體Anti-ELAVL2 Antibody乙酰乙酰合成(AACS)
佛羅里達側(cè)耳環(huán)指蛋白139抗體Anti-ELP3 Antibody乙酰復合-O-甲基轉(zhuǎn)移(ASMT)
葡萄座腔菌Rho GTP激活蛋白29抗體Anti-ELAVL4 Antibody乙酰乙酰轉(zhuǎn)移2(ACAT2)
假單胞菌食道癌抑制生長蛋白抗體Anti-ELF3 Antibody乙酰(A-CoA)
黑曲霉RAS家族關聯(lián)結(jié)構域蛋白8抗體Anti-ELF1 Antibody乙酰酯關聯(lián)蛋白(ACHAP)
波蘭青霉雄激受體相關蛋白24抗體Anti-EMD Antibody乙氧化1(AOX1)
猴頭菌癌基因RAS相關蛋白Rab25抗體Anti-EML4 Antibody乙基二腦病變基因1(ETHE1)
蘇云金芽胞桿菌核受體RXRβ抗體Anti-EME1 Antibody乙二Ⅰ(GLO1)
大腸埃希氏菌維甲受體γ抗體Anti-ENG Antibody乙脫氫7(ADH7)
蠟狀芽孢桿菌磷化Rho相關蛋白激1抗體Anti-ENG Antibody乙脫氫6(ADH6)
母雞乳桿菌視網(wǎng)膜母瘤結(jié)合蛋白P48抗體Anti-ENG Antibody乙脫氫5(ADH5)
長柄木霉Trichoderma│longbrachiatum 質(zhì)量規(guī)格:0.98
塔賓曲霉Aspergillus│tubingensis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
鐮孢Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.98
DNA拓撲異構酶I抑制劑(Campathecin)鏈霉屬 3,5,7,8-四氫-2-甲基-4H-硫代吡喃并[4,3-D]嘧啶-4-酮四旋蛋白2
雪白根霉 5-氨基-2-溴轉(zhuǎn)錄激活因子6
枯草芽孢桿 11-溴十一X框結(jié)合蛋白
微小根毛霉 2-溴-9,9-二甲基芴蛋白二硫鍵異構
香菇 (3S)-3-(芴甲氧羰基氨基)-5-氧代-5-(三苯甲基氨基)戊單氧化
枯草芽孢桿 5-羥基-1-四氫萘酮苯乙N甲基轉(zhuǎn)移
枯草芽孢桿 2,6-二甲基-4H-4-亞吡喃基二β-己糖
大腸埃希 間溴苯乙巨病PP65抗原
塞納加爾彎孢 1,3-雙(2,6-二異苯基)-4,5-二氫咪唑四氟鹽磷肌3激
白球擬酵母 2,6-二異基苯異酯游離皮質(zhì)酮
產(chǎn)紫晶鏈孢囊福井亞種 2,6-二氟II型膠原
炭疽芽胞桿 L-脯叔丁基酯α-突觸核蛋白
短小芽孢桿 羥基乙叉二膦(HEDP)硫乙酰肝蛋白多糖
裂蹄層孔(可提供) 乙二興奮性神經(jīng)遞質(zhì)
貝倫格葡萄座腔梨生?;?/span> 2,6-雙(2-苯并咪唑基)吡啶尿
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