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貨號	FS-X10805

中文名稱：RNR抑制劑(COH29)

英文名稱：COH29

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10805

產(chǎn)品介紹:

COH29是一種高效的RNR抑制劑，具有抗癌活性,在KB細(xì)胞中的IC50值為8μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1190932-38-7

純度：98.04%

分子量：420.44

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

櫟小皮傘大鼠肉堿脂酰轉(zhuǎn)移Anti-NECTIN3 Antibody人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)

大腸埃希氏桿菌兔子補(bǔ)體片斷3aAnti-NECTIN1 Antibody人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)

枯草芽孢桿菌小鼠溶菌Anti-NEDD1 Antibody人鈣調(diào)磷(CaN)

鍋孢霉人CD14分子Anti-NECTIN3 Antibody人鈣調(diào)磷(CaN)

栗酒裂殖酵母人凋亡誘導(dǎo)因子Anti-NECTIN3 Antibody人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

耐輻射奇球菌兔子基質(zhì)金屬蛋白3Anti-NEFH Antibody人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

白僵菌大鼠磷化乙酰羧化Anti-NEFH Antibody人鈣結(jié)合蛋白(CR)

釀酒酵母小鼠可溶性CD30Anti-NEFL Antibody人鈣結(jié)合蛋白(CR)

臭曲霉兔磷TRAP-5b Anti-NEDD4 Antibody 人骨形成蛋白6(BMP-6)

冠突曲霉人白共同抗原Anti-NEFL Antibody人骨形成蛋白6(BMP-6)

冷桿菌兔子可溶性CD40配體Anti-NEFM Antibody人脂肪結(jié)合蛋白(FABP)

聚生殼菌小鼠可溶性肌球蛋白重鏈Anti-NEIL3 Antibody人脂肪結(jié)合蛋白(FABP)

海洋桿菌大鼠金屬硫蛋白Anti-NEGR1 Antibody人腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)

膜醭畢赤酵母大鼠心肌特異性肌鈣蛋白TAnti-NEIL3 Antibody人腺三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)

化妝品霉、小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1Anti-NEFM Antibody人羥脯糖蛋白(HRGP)

釀酒酵母兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類Anti-NEK2 Antibody人羥脯糖蛋白(HRGP)

胰島β細(xì)胞生長因子抗體邊莢魚藤根瘤菌人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞

環(huán)指蛋白149抗體假地豆根瘤菌人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

心臟蛋白磷1結(jié)合蛋白/環(huán)指蛋白158抗體波葉山螞蟥根瘤菌人胎盤絨毛癌細(xì)胞

環(huán)指蛋白180抗體本氏木蘭根瘤菌人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞
RNR抑制劑(COH29)香菇* 固體培養(yǎng)基低氧誘導(dǎo)因子-1β

成晶節(jié)桿改良GAM瓊脂抑劑水通道蛋白1

多脂鱗傘高鹽度腦心浸液肉湯水通道蛋白2

枯草芽孢桿膽汁七葉瓊脂水通道蛋白3

蘇云金芽孢桿太平洋亞種腦心浸液肉湯腎損傷分子1

柱狀田頭菇（茶樹菇、楊樹菇）酵母蛋白胨培養(yǎng)基氧化三

巴貝斯蟲（青海貴南株）胰蛋白胨大豆瓊脂血管生成1

耐冷冷桿類桿-膽汁-七葉（BBE）瓊脂血管生成2

大毛霉鋰鹽改良MRS培養(yǎng)基血小板反應(yīng)蛋白;凝血敏感蛋白1

大腸埃希甘露瓊脂培養(yǎng)基CD31分子

尖角凸臍蠕孢 3,5-雙(三氟甲基)苯甲酰基質(zhì)金屬蛋白2

金黃桿屬 KF鏈球肉湯白介12

蘋果黑腐皮殼 RODAC培養(yǎng)皿（TSA）活化蛋白C

新疆鹽地桿鋰鹽自然殺傷

麻疹孿生球四硫磺鹽煌綠增液（TTB肉湯）主要急性期蛋白

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