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可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 15:53:11瀏覽次數(shù):163次

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貨號 FS-X10928
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產(chǎn)品介紹:

PF-562271是有效的ATP競爭性的可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑,IC50分別為1.5和13nM。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:717907-75-0

純度:99.36%

分子量:507.49

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱:可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)

英文名稱:PF-562271

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

貨號:FS-X10928

實(shí)驗(yàn)報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

阿穆爾斯克灣鹽地桿菌人α淀粉Bacillus cereus小鼠血管生成4(ANG-4)

黑腐皮殼菌人堿性磷Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)

核黃氧化德沃斯氏菌人天青殺Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)

蕈狀芽孢桿菌人血管緊張肽ABacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)

膠紅酵母人胰淀粉Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)

牛輪狀?。捎嗁彛┤?/span>α烯化Bacillus cereus小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)

蠟狀芽孢桿菌人膠原IIBacillus cereus小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)

冷海水黃桿菌人膠原IBacillus cereus小鼠CD30分子(CD30)

短芽孢桿菌人磷化蛋白激CBacillus cereus小鼠CD30分子(CD30)

毛殼人磷化外信號調(diào)節(jié)激Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ

黑曲霉人乙酰酯Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ

Brevibacillus parabrevis人葡萄糖氧化Bacillus cereus小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)

克魯斯假絲酵母人酪羥化Bacillus cereus小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)

紅托竹蓀人多巴脫羧Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化因子(ECF)

硬結(jié)節(jié)桿菌人非神經(jīng)元性烯化Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化因子(ECF)

伯克霍爾德氏菌人多巴-β羥化Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)

WD重復(fù)蛋白16抗體蠶蛹1號小鼠肝細(xì)胞AML12(干細(xì)胞庫保藏)

WW結(jié)構(gòu)域E3泛連接1抗體平菇2000(京瑞)大耳山羊肺細(xì)胞

乙型肝炎X相關(guān)蛋白2抗體PL20(雙抗黑平)正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞

X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白4抗體嗜熱側(cè)孢霉昆蟲細(xì)胞
可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)費(fèi)比恩塞伯林德納氏酵母 二烯基二硫二酰

綠粘帚霉 三縮四乙二過氧化物體增殖物激活受體α

枯草芽胞桿 甲基烯羥乙酯過氧化物體增殖物激活受體β

簇生黃韌傘 鄰乙氧基苯甲酰腺活化蛋白激

尖孢鐮刀 對甲苯磺甲酯乙酰羧化

豇豆慢生根瘤 十四氨酰磷合成I

延長赤擔(dān)孢酵母 三叔丁色氧化

球孢毛殼 3-乙酰吡啶延胡索還原

哈茨木霉 2-乙酰吡啶酮

緊縮花褶傘 2,4,6-三溴乳脫氫

敵鼠鈉鹽速測包 甲合次硫氫鈉琥珀脫氫

堆形艾美耳球蟲 亞硝鈷鈉異檸檬脫氫

向日葵殼針孢 鉻鈉6-磷葡萄糖脫氫

薩赫里劍 次亞磷鈉生長

彎孢 化鍶補(bǔ)體蛋白3

 


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