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貨號(hào)	FS-X10856

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：NAMPT抑制劑(GMX1778)(CHS-828

英文名稱：GMX1778

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10856

產(chǎn)品介紹:

GMX1778(CHS-828)是NAMPT高效抑制劑，可抑制劑NAD_addition_的生化合成，IC50值小于25nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：200484-11-3

純度：99.65%

分子量：371.86

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

耐多抗諾卡氏菌大鼠P物質(zhì)Anti-PRKAR1A Antibody人類似RIKEN cDNA 26307008 基因

長(zhǎng)孢洛德酵母大鼠αL巖藻糖Anti-PRKAG2 Antibody人類似RIKEN cDNA 26307008 基因

卷枝毛霉卷枝變型小鼠γ干擾誘導(dǎo)蛋白16/p16Anti-PRKAR1B Antibody人類似RIKEN cDNA 209K09 基因

安大略假絲酵母人肺炎支原體抗體Anti-PRKAR2A Antibody人類似RIKEN cDNA 209K09 基因

泡盛曲霉人肺炎衣原體抗體Anti-PRKD1 Antibody人ras同源物基因家族成員b(RHOB)

阿爾通山堿線菌大鼠甲狀腺過(guò)氧化物Anti-PRKCZ Antibody人ras同源物基因家族成員b(RHOB)

膠孢小鼠基質(zhì)衍生因子1aAnti-PRKCD Antibody人假定蛋白LOC677340

食吡啶紅球菌小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Anti-PRKCSH Antibody人假定蛋白LOC677340

香菇大鼠胰島Anti-PRKDC Antibody人假定蛋白LOC433328

大腸埃希菌人肺耐藥蛋白Anti-PRKG1 Antibody人假定蛋白LOC433328

釀酒酵母人α1抗胰糜蛋白Anti-PRKG2 Antibody人髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88(MYD88)

黃傘大鼠抗IgE受體抗體Anti-PRKG2 Antibody人髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88(MYD88)

中孢短芽孢桿菌小鼠血漿α顆粒膜蛋白Anti-PRKX Antibody人干擾活化基因205(Ifi205)

普雷恩毛霉大鼠抗IVIgG抗體Anti-PRKN Antibody人干擾活化基因205(Ifi205)

芹側(cè)耳（杏鮑菇）人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白AAnti-PROKR1 Antibody人組織相容性2-K1-K 區(qū)(H2-K1)

哈氏弧菌小鼠髓過(guò)氧化物Anti-PRKY Antibody人組織相容性2-K1-K 區(qū)(H2-K1)

TBR1蛋白抗體硫色鐮刀菌KYSE180 人食管鱗癌細(xì)胞

感光細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子TULP3抗體枝狀枝孢KYSE140 人食管鱗癌細(xì)胞

TSK蛋白抗體擬土黃紅菇SNU119 人卵巢癌細(xì)胞

味覺(jué)受體蛋白家族2亞基5抗體茶銀耳A1847 人卵巢癌細(xì)胞
NAMPT抑制劑(GMX1778)(CHS-828產(chǎn)紅青霉 CHO培養(yǎng)基基礎(chǔ)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β

基簡(jiǎn)馬杜拉放線 SCHAEDLER瓊脂轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

尿腸球 Campy-Cefex瓊脂基礎(chǔ)轉(zhuǎn)鐵蛋白

褐紅小孔 2,5-二吡啶轉(zhuǎn)鐵蛋白受體

蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 Campy-Cefex添加劑總蛋白

平菇 Nα-甲酰基-DL-色總抗氧化能力

托姆青霉 L-1,4-二硫代蘇糖阻抑

豌豆根瘤 4-甲基組

黑曲霉 (S)-(-)-環(huán)氧烷組織因子

玉乳桿三(二基)膦腦磷脂

假單胞二環(huán)己烷并18-冠-6

黃肉座 2,2'-(2-丁炔-1,4-二基二氧)二乙(含約的異構(gòu)體)心磷脂

樟疫霉苯基三乙基溴化鞘磷脂

解脂假絲酵母單硝異山梨酯偽狂犬病病GPI

香菇 2-氨基-5-內(nèi)皮型一氧化氮合
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)