13524666654
當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>抑制劑激活劑>> Rapamycin 自噬誘導劑，mTOR抑制劑
| 貨號 | FS-X10254 |
|---|
英文名稱：Rapamycin(Sirolimus)
產(chǎn)品規(guī)格：1mg
貨號：FS-X10254
產(chǎn)品介紹:
英文名稱：Rapamycin(Sirolimus) 產(chǎn)品規(guī)格：1mg ：53123-88-9 分子量：914.18 儲存：-20℃，有效期36個月 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
孤島鹽單胞菌二甲基化組蛋白H3K4抗體Human SCN4B 類人猿
海南小短桿菌二甲基化組蛋白H3K9抗體Human SDCCAG10 類人猿免疫球蛋白G4(IgG4)免疫試劑盒
梾木生殼針孢基化組蛋白H3抗體Human SEC23IP 類人猿巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒
植物乳桿菌植物亞種乙?；M蛋白H3抗體Human VTCN1(V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1) 類人猿降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌乙?；M蛋白H3抗體Human SEC24C 類人猿降鈣(CT)免疫試劑盒
燼灰紅鏈霉菌果糖發(fā)酵亞種磷化肝核因子4α抗體Human SEC24A 類人猿黃體生成(LH)免疫試劑盒
賴芽胞桿菌屬高遷移率核小體結(jié)合蛋白1Human SEC31A 類人猿骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒
根瘤菌磷化組蛋白H3抗體Human SDR39U1 蝌蚪
木蹄層孔菌組織相容性復合體α抗體Human SEC5/EXOC2 蝌蚪睪(T)免疫試劑盒
黑木耳肝生長因子激活抑制蛋白2抗體Human SEC61alpha 蝌蚪雌二(E2)免疫試劑盒
植物乳桿菌HOMER2抗體Human SDR42E1 蝌蚪γ基丁(GABA)免疫試劑盒
蟲類神食酵母瘤病調(diào)控因子1抗體（鋅指蛋白395）Human SDCCAG8 鯨
桔橙小單孢菌人類狀瘤病18 E6單克抗體Human SCN4B 鯨孕激/孕(PROG)免疫試劑盒
白鵝膏菌（不可訂購）異質(zhì)核糖核蛋白F抗體Human SDCCAG10 鯨狀腺原(T3)免疫試劑盒
沃氏富鹽菌異質(zhì)核糖核蛋白K抗體Human SCNM1 鯨皮質(zhì)(Cortisol)免疫試劑盒
相思根瘤菌異質(zhì)核糖核蛋白L抗體Human SCNN1A 鯨甲狀腺(T4)免疫試劑盒
: N144資源名稱: 大腸埃希氏菌 質(zhì)量規(guī)格：1.0 M in toluene常春藤皂元
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品D-松
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品
Rapamycin 自噬誘導劑，mTOR抑制劑聚紅粉端孢霉 6-噠3-羧乙酯Flag標簽
紅色蠟蘑 甲基膦二甲酯腺病抗體
香港洛克氏 三溴鼠痘病抗體
白僵 N-甲基二環(huán)己基肺炎病抗體
長蠕孢 磷氟達拉濱呼腸孤病III型抗體
對溴苯甲酯脈絡(luò)叢腦膜炎病IgG抗體
Aquimonas 4-甲基吡唑流行性出血熱病抗體
Microbacterium marinilacus D-(+)-蘋果二乙酯過氧化物
變異鏈霉 5-氨基-1,2,4-噻二唑完整的成纖維生長因子23
干草鞘氨單胞 5--2-苯甲成纖維生長因子23的C端裂解片段
蠟狀芽孢桿 2-溴-5-苯甲去乙?；疭irtuin-6
枯草芽胞桿 雙(3-氨基-4-羥苯基)砜球蛋白G2b
產(chǎn)堿普羅威登斯 2-氨基-5-溴-3-芐氧基吡啶球蛋白G3
假單胞 7-氮雜-5-羧組織因子
鹽假單胞 2-(3-1H-吡唑基)吡啶抗抗體
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責，儀表網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。
儀表網(wǎng)