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貨號 | FS-X10551 |
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中文名稱:DNA解旋抑制劑(Irinotecan)
英文名稱:Irinotecan
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號:FS-X10551
產(chǎn)品介紹:
Irinotecan(CPT-11)能通過抑制拓撲異構酶1阻止DNA的解旋。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:97682-44-5 別名:(+)-Irinotecan;CPT-11 純度:98.78% 分子量:586.68 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
氏假單胞菌磷化鳥核交換因子VAV3抗體Anti-MCU Antibody固合(ALDOS)
季也蒙假絲酵母囊泡相關膜蛋白相關蛋白A抗體Anti-MCM7 Antibody(PB0260)全色C合(HCCS)
克魯維畢赤酵母癌基因VAV2抗體Anti-MDM2 Antibody全羧合成(HLCS)
枯草芽孢桿菌囊泡相關膜蛋白相關的蛋白BAnti-MDM4 Antibody去唾液糖蛋白受體2(ASGR2)
土生類諾卡氏菌低密度脂蛋白受體抗體Anti-MDK Antibody去唾液糖蛋白受體1(ASGPR1)
果瘡痂芽枝霉神經(jīng)視錐蛋白樣1抗體(神經(jīng)鈣蛋白)Anti-MDM2 Antibody去甲腎上腺轉運蛋白(NET)
釀酒酵母轉錄輔助因子退變樣蛋白2抗體Anti-MDC1 Antibody去泛化3(DUB3)
動球菌轉錄輔助因子退變樣蛋白4抗體Anti-MED14 Antibody去精加壓(DDAVP)
糖螺菌絲/蘇特定蛋白磷抗體Anti-MECP2 Antibody趨化因子C-基元受體1(XCR1)
不規(guī)則分枝發(fā)簇孢血管生長因子VG5Q抗體Anti-MED13 Antibody趨化因子C-基元配體2(XCL2)
無花果上皮型鈣粘附分子抗體Anti-ME2 Antibody趨化因子C-X-C-基元受體7(CXCR7)
堆冰川居真菌細菌囊泡轉運蛋白1家族蛋白抗體Anti-MED15 Antibody趨化因子C-X-C-基元受體6(CXCR6)
薄花邊傘6-2液泡分選蛋白4抗體Anti-MED20 Antibody趨化因子C-X-C-基元受體5(CXCR5)
蘑菇線粒體外膜孔蛋白3抗體(電壓依賴陰離子通道蛋白3)Anti-MED18 Antibody趨化因子C-X-C-基元受體4(CXCR4)
小單孢菌視覺抑制蛋白抗體Anti-MED4 Antibody趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)
異配囊接霉血管內皮生長因子受體3抗體Anti-MED6 Antibody趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)
血清應答因子抗體腦膜炎奈瑟菌大鼠小梁網(wǎng)細胞
蛋白抑制劑14抗體白色鏈霉菌白色亞種大鼠視網(wǎng)膜色上皮細胞
分泌受體抗體Lentzeasp大鼠胎兒真皮成纖維細胞
鈉-糖共轉運載體1抗體帶小棒鏈霉菌大鼠表皮角質形成細胞
DNA解旋抑制劑(Irinotecan)鐮刀 4--2-三氟基異酯傳染性鼻炎
甘藍黑腐病禾谷類致病變種 2--5-甲(易)卵黃高磷蛋白
大腸埃希氏 3- 巰基正酯雌受體
黃綠青霉 唑來磷一水化合物胱
果生鏈核盤 溴鄰苯三紅色
大腸埃希氏桿 焦磷銅四水合物I群禽腺病
細鏈格孢玉蘭?;?/span> 8-溴喹啉禽腺病4型
孟氏假單胞 2-甲氧基-6-(易)禽腺病4型抗體
大腸埃希氏桿 2,7-萘二磺鈉輔Q10
糞腸球 3,4-Methylenedioxyphenethylamine Hydrochloride主要急性期蛋白
黑木耳 雙(2,4-二基)草酯(易)淀粉樣前體蛋白
枯草芽孢桿 三烯膦內質網(wǎng)應激相關蛋白CHOP
玫瑰色鏈霉 2-氟-6-泛化p62
枯斑擬盤多毛孢 芐基-(S)-(+)-縮水甘油轉錄激活因子-4
孟氏假單胞 4-乙基辛半胱蛋白1
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