長春新堿(Vinblastine)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10253

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：長春新堿(Vinblastine)

英文名稱：Vinblastine

產(chǎn)品規(guī)格：100μl|500μl

貨號(hào)：FS-X10253

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Vinblastine

產(chǎn)品規(guī)格：100μl|500μl

濃度：1mg/mL in DMSO

分子量：811

純度：＞98%(HPLC)

儲(chǔ)存：-20℃，有效期12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

食品檢測(cè)用鼠傷門氏菌熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體Human CFP(Properdin) 驢卵泡激(FSH)免疫試劑盒

解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種Heme結(jié)合蛋白2抗體Human SECISBP2 驢黃體生成(LH)免疫試劑盒

大麗輪枝孢肝粘附分子2抗體Human SEC63 驢雌二(E2)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌基己糖D抗體Human RRBP1(Ribosome-binding protein 1) 鹿

雞白痢沙門氏菌HHLA2蛋白抗體Human Secretin receptor 鹿胰島樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)免疫試劑盒

放射桿狀根瘤菌羥脯抗體Human SECTM1(Secreted and transmembrane protein 1) 鹿胰島樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒

壺黑蛋巢布諾德變型熱休克蛋白10抗體Human PGS1(CDP-diacylglycerol–glycerol-3-phosphate 3-phosphatidyltransferase, mitochondrial) 鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒

香菇同源盒蛋白PRH抗體Human Securin/PTTG1 鹿尿氧化免疫試劑盒

谷棒桿菌羥類固脫氫17β抗體Human SELK 鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒

釀酒酵母皰疹病相關(guān)泛特異性蛋白7抗體Human SEMA3C 鹿免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒

黃曲霉同源異型盒基因HOXA5蛋白抗體Human SDHC 鹿氧化(XOD)免疫試劑盒

棲土曲霉異染色質(zhì)蛋白1-α(HP1α)抗體Human SDHB 鹿環(huán)磷腺(cAMP)免疫試劑盒

Lactococcus組蛋白H4抗體Human AKAP17A(A-kinase anchor protein 17A) 鹿環(huán)磷鳥(cGMP)免疫試劑盒

棒曲霉乙酰化組蛋白H4抗體Human SDR39U1 鹿紅膜蛋白(EMP)免疫試劑盒

香茅假單胞菌基化組蛋白H3抗體Human SDPR 鹿次氧化免疫試劑盒

放射形根瘤菌二甲基化組蛋白H3抗體Human SDR42E1 鹿γ干擾(IFNG)免疫試劑盒

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%佛手柑內(nèi)酯

曲霉Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品白花前胡

皺紋假單胞菌Pseudomonas│corrugata 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品花椒
長春新堿(Vinblastine)亞銹褐褶 6-溴-2,3-二氮雜萘酮活躍腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

大腸埃希 5-甲氧基-2-甲基-3-乙甲酯α1微球蛋白

球孢白僵 1-Boc-母親DPP同源物4

Taibaiella 2,2-二甲基-1-視網(wǎng)膜母瘤蛋白1

達(dá)班湖喜鹽芽孢桿 1-甲基-3-甲脫腳病病

紅球 2--4-基嘧啶單核趨化蛋白2

根霉 2,3,5-三溴吡啶白三烯E4

葉點(diǎn)霉屬 2-溴-3--5-(三氟甲基)吡啶Wnt-16蛋白

塔賓曲霉 5-溴-3--7-氮雜神經(jīng)酪激受體1

矮小青霉 3-氟-5-吡啶神經(jīng)酪激受體2

發(fā)酵畢赤酵母 8--5-氨基喹啉腫瘤壞死因子受體超家族成員1B

香菇 3-氨基異煙膠原吡啶交聯(lián)

枯草芽孢桿十二烷基二苯二磺鈉TAU-1蛋白

芽胞桿來氟洛TAU-5蛋白

皺紋假單胞 (2-甲氧基-5-)乙白血病病抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)