PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
?
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：對蝦肝腸孢子蟲病（EHP)核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10397
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
假絲酵母生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -484℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

鏈霉菌（灰褐類群）培養(yǎng)基: 12模式菌株: no植物根際提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 28-30 定期移植法

米曲霉醬油用。模式菌株: no曲子提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃

米曲霉培養(yǎng)基: CM0077曲菌提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

球腔菌屬培養(yǎng)基: CM0014模式菌株: no冬蟲夏草提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 20℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

少根根霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0017提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

AS2.1737培養(yǎng)基: CM0077模式菌株: no種屬: Candida│oleophila提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

 -485℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

鏈格孢霉屬培養(yǎng)基: CM0014抗癌活性提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C -80℃冰箱凍結(jié)

蘇云金芽孢桿菌幕蟲亞種生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 2提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

副豬嗜血桿菌流行病學(xué)調(diào)查及疫苗制備研究模式菌株: no心包提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 451生長條件: 37℃

云南紅球菌潛在的有機污染物降解菌/分離自代十六烷富集菌群；產(chǎn)酶微生物/淀粉酶，脂酶（三丁甘油酯）模式菌株: no水樣/表層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

 AS2.614用于制酒模式菌株: no種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 13生長條件: 25-28℃

吸水鏈霉菌培養(yǎng)基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -486℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

酒石Tartaric acidAR500g

G0524-5GGlutathione (Oxidized) 谷胱甘肽(氧化型)27025-41-85g48

C0230-100GChlorampxenicol 錄霉素56-75-7100g

Ponceau S Staining Solution100ml(10X)

肌紅蛋白100mg

四Tetraxy7nofuranHPLC500ml

LBG07Sepharose 4B-anti-Fc mAb 蛋白純化柱174

P1004-100MGPolymyxin B Sulfate 多粘菌素B流鹽1405-20-5100mg

4',6-二脒基-2-本基吲哚1mg

無內(nèi)素質(zhì)粒大量提取試劑盒5T

大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒 ，英文名： IGF-1 ELISA Kit

人抗磷壁抗體(TA)ELISA檢測試劑盒Humanai-teichoicacidaibody,TAELISAKit 96T/48T

大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)免疫試劑盒 Rat α-Glucosidase ELISA Kit

CLIAKitforsTLR2ELISAKit大鼠可溶性Toll樣受體2規(guī)格：48T/96T

人體組織N-乙酰轉(zhuǎn)移酶1(NAT1)活性比色法定量檢測試劑盒20次

人抗SS-A/Ro抗體ELISAKit人抗SS-A/Ro抗體ELISAKit，48T/96T人抗SS-A/Ro抗體ELISAKit，48T/96T規(guī)格：48T/96T
對蝦肝腸孢子蟲?。?/font>EHP)核酸檢測試劑盒1ul接種環(huán)規(guī)格：400支/包，10包詳情介紹

纖維二發(fā)酵管a規(guī)格：10支/盒用途：用于大腸桿菌O157的生化鑒定。

單核細胞增生李斯特氏菌生化鑒定試劑盒（GB）規(guī)格：9支/盒用途：用于單核細胞增生李斯特氏菌的生化鑒定。

大腸埃希氏菌生化鑒定試劑盒規(guī)格：4支/盒用途：于大腸埃希氏菌的 IMViC 生化鑒定。

青化鉀對照生化管規(guī)格：10支/盒用途：用于沙門氏菌的生化鑒定。

沙門氏菌生化鑒定試劑盒（SN）規(guī)格：10支/盒用途：用于沙門氏菌的生化鑒定。