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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 剛果紅(β-淀粉樣蛋白染料)
貨號(hào) | FS-X9809 |
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產(chǎn)品介紹:
分子量:696.66 溶解性:溶于水 激發(fā)波長(zhǎng):497nm 儲(chǔ)存:-20℃,避光,有效期一年 |
中文名稱:剛果紅(β-淀粉樣蛋白染料)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:10mg
貨號(hào):FS-X9809
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
補(bǔ)體1抑制因子(C1INH)英文名:C1INH 9號(hào)染色體開放閱讀框86抗體包裝5g
補(bǔ)體1q(C1q)英文名:C1q 鈣粘附分子18抗體包裝25g
脫氫磷(PDP)英文名:PDP CD276抗體包裝5g
脫氫激同工4(PDK4)英文名:PDK4 21號(hào)染色體開放閱讀框25抗體包裝1g
脫氫β(PDHβ)英文名:PDHβ 22號(hào)染色體開放閱讀框36抗體包裝5g
脫氫α(PDHα)英文名:PDHα 補(bǔ)體組分1q子成分樣蛋白1抗體包裝1g
羧化(PC)英文名:PC CD44抗體包裝25g
糖磷異構(gòu)1(TPI1)英文名:TPI1 9號(hào)染色體開放閱讀框114抗體包裝5g
別孕烯(AP)英文名:AP CD8β鏈(CD8-β)抗體包裝100mg
表皮轉(zhuǎn)谷酰胺(TGM3)英文名:TGM3 6號(hào)染色體開放閱讀框1抗體包裝25g
表皮調(diào)節(jié)(EREG)英文名:EREG γ晶狀體蛋白S/γS-crystallin抗體包裝5g
表皮生長(zhǎng)因子受體2(EGFR2)英文名:EGFR2 9號(hào)染色體開放閱讀框72抗體包裝25g
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)英文名:SPD 鈣粘附分子10抗體包裝5g
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)英文名:SPA R Cadherin/CDH4包裝25g
表睪(ET)英文名:ET 大鼠細(xì)小病H-1株(H-1)抗體包裝5g
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR幽門螺旋菌IgG試劑盒乙酰蝙蝠葛蘇林堿;O-diacetyld
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品幽門螺旋桿菌IgM試劑盒一葉萩堿;Securinine
膠孢刺盤孢Colletotrichum│gloeosporioides 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR硬骨試劑盒異葒草; Homoorientin
剛果紅(β-淀粉樣蛋白染料)纖維纖維微 甘銅風(fēng)疹病抗體
冷溫木拉克酵母 硅四鈉鹽吸血蟲抗體
斯氏土地桿 2-甲基-1,3-苯并惡唑-6-羧CD34分子
大腸埃希氏 雙(4-基苯基)甲腫瘤干標(biāo)記物
弗雷德里克斯堡假單胞 3-溴-2,6-二甲氧基吡啶Parkin蛋白
克魯斯假絲酵母 5''-溴-3,3''-二辛基-[2,2':5',2''-三噻吩]-5-甲維生B
小殼焦孢屬 羥鈷金黃色葡萄球腸B
釀酒酵母 3-氟-5-溴苯金黃色葡萄球腸C
釀酒酵母 棕櫚異辛酯金黃色葡萄球腸E
蠟狀芽孢桿 2,4-二煙前列腺H2
蘇云金芽孢桿 2-乙黃原基異丁超氧化物歧化
白僵 (1R,2R)-2-氨基環(huán)己鹽鹽二氫蝶啶還原
傳染性喉氣管炎病 (1S,2S)-2-氨基環(huán)己鹽鹽CD73分子
釀酒酵母 肉桂肟, mixed isomers7-脫氫膽固還原
矩圓黑盤孢 2-氨基-5-溴-4-甲基噻唑鹽鹽肝微粒體混合功能氧化
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