CDK1抑制劑(Ro-3306)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10426

中文名稱：CDK1抑制劑(Ro-3306)

英文名稱：Ro-3306

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10426

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Ro-3306

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

Ro-3306是一種有效的，選擇性的CDK1抑制劑，對(duì)CDK1，CDK1/cyclin B1和CDK2/cyclin E的Ki值為分別為20nM，35nM和340nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：872573-93-8

純度：96.77%

分子量：351.45

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

小平菇（秀珍菇）磷化P63腫瘤抑制基因抗體Anti-C9orf72 AntibodyToll樣受體4(TLR4)

小單孢菌磷化P63腫瘤抑制基因抗體Anti-CA1 AntibodyToll樣受體3(TLR3)

橢園釀酒酵母蛋白甘露糖基轉(zhuǎn)移1抗體Anti-CA12 Antibodytoll樣受體2(TLR2)

熱帶假絲酵母磷化嗜中性粒胞漿因子4抗體Anti-CA2 AntibodyToll樣受體1(TLR1)

鴨疫里氏桿菌核糖體S6蛋白激β2抗體Anti-CA4 AntibodyTH糖蛋白(THP)

松針散斑殼磷化核糖體S6蛋白激β2抗體Anti-CA3 Antibody(PB1104)TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)

根瘤菌磷化核糖體S6蛋白激β2抗體Anti-CACNA1C Antibody(PB0394)Tau蛋白(TAU)

威爾酵母磷化核糖體S6蛋白激β2抗體Anti-CA4 AntibodyTau-231蛋白(TAU-231)

謝瓦散囊菌磷化核糖體S6K2蛋白激抗體Anti-CACNA2D2 AntibodyTau-181蛋白(TAU-181)

小克銀漢霉C0磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CACYBP AntibodyTAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP/TDP43)

植物乳桿菌磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CACNA1D Antibody(PB0286)s腺同型半胱(SAH)

魚乳桿菌磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CAD AntibodySyndecan-3/(SDC3)

卷枝毛霉卷枝變型磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CACYBP AntibodySyndecan-1/CD138(SDC1)

毛柄金錢菌(金針菇)磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CALB2 AntibodySTEAP家族成員4(Steap4)

黑曲霉磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CALB1 Antibody(PB0017)STEAP家族成員1(Steap1)

大腸桿菌磷化腫瘤抑制基因P53抗體Anti-CADM1 AntibodyStathmin 1(STMN1)

: AS4.252資源名稱: 白黃鏈霉菌質(zhì)量規(guī)格：>99%

: AS4.166資源名稱: 黃色長(zhǎng)孢鏈霉菌質(zhì)量規(guī)格：0.98

金頂側(cè)耳Pleurotus│citrinopileatus Singer 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
CDK1抑制劑(Ro-3306)大腸埃希氏二烯二乙二酯谷脫羧1

栗疫 4-羥基-1-茚酮谷脫羧2

灰玫瑰青霉雙(三-o-甲苯基膦)二化鈀(II)脂肪連接

墻支頂孢 2-羥基-4-甲氧基-5-磺二苯甲酮硬脂酰去飽和2

蘇云金芽孢桿 (S,S)-(-)-雙(α-甲芐基)鹽鹽弓形蟲IgG抗體

科恩氏 2.6-二氟-4-甲氧基苯血小板膜糖蛋白纖維蛋白原受體

球形賴芽孢桿雙酮-D-半乳糖可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物

美澳型核果褐腐病烯基二二甲酯Ⅶ

短波單胞 2-乙酰氧基異丁酰溴V

白鱗炭角 5′-O-(4,4′-二甲氧基三苯甲基)胸Ⅺ

斯氏李斯特氏 N-BOC-2-氨基-5-溴噻唑線粒體呼吸鏈復(fù)合物I

變天藍(lán)鏈霉 4-(二甲基氨甲?；?苯Xa

糞鞘氨桿三丁雙(三氟甲磺酰)亞XIa

根瘤 N,N'-雙芐氧羰基-L-賴Disabled同源物1

短芽孢桿屬 3-氟-4-羥基苯磷化Disabled同源物1

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