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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> caspase-3激活劑(細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)
貨號(hào) | FS-X10329 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Silvestrol 產(chǎn)品規(guī)格:1mg|2mg Silvestrol是一種天然產(chǎn)物,能夠激活caspase-3來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):697235-38-4 別名:(-)-Silvestrol 純度:99.28% 分子量:654.66 結(jié)構(gòu)式: Silvestrol結(jié)構(gòu)式 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:caspase-3激活劑(細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)
英文名稱:Silvestrol
產(chǎn)品規(guī)格:1mg|2mg
貨號(hào):FS-X10329
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
馬泰勒蟲(青海剛察株)成熟T淋巴增殖蛋白1抗體Human NR2C1(Nuclear receptor subfamily 2 group C member 1) 犬尿(KYN)
枯草芽孢桿菌絲裂原活化蛋白激8相互作用蛋白1抗體Human NR2B 糖還原(AR)
牛瘟病肌球蛋白輕鏈6抗體Human NOVA2 縮(ALD)
副結(jié)核補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(-)陰性血清磷化肌增強(qiáng)因子2C抗體Human F2R(Proteinase-activated receptor 1) 固(ALD)
土壤短芽胞桿菌磷化黑色瘤粘附分子CD146抗體Human NOX3(NADPH oxidase 3) 全段甲狀旁腺(i-PTH)
琥珀乳牛肝菌肌增強(qiáng)因子2C抗體Human NOXA2/p67phox 去乙?;疭irtuin-7(SIRT7/SIR2L7)
大腸埃希菌促黑激γ1抗體Human NMUR1 去乙?;疭irtuin-6(SIRT6/SIR2L6)
干酪乳桿菌小鼠抗激-M2抗體Human NNT 去乙?;疭irtuin-5(SIRT5/SIR2L5)
貝萊斯芽胞桿菌甲基化多聚腺結(jié)合蛋白抗體Human NPAS1 去乙?;疭irtuin-4(SIRT4/SIR2L4)
灰離褶傘有絲分裂原誘導(dǎo)基因6抗體Human NNT 去乙酰化Sirtuin-2(SIRT2/SIR2L/SIR2L2)
平菇線粒體融合蛋白Mfn2抗體Human NMUR1 去乙?;疭irtuin-1(SIRT1/SIR2L1)
地衣芽孢桿菌珠蛋白1抗體Human NOXA2/p67phox 去乙?;囸I激(dGHRL)
迂回殼囊孢肌球蛋白輕鏈9抗體Human NPAS1 去唾液糖蛋白受體(ASGPR)
香菇磷化肌球蛋白輕鏈9抗體Human NO66/C14orf169 去唾液糖蛋白受體(AGSPR)
雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)NADH復(fù)合體1抗體Human NPAS3 去甲腎上腺(NE)
雙環(huán)林地蘑菇癌相關(guān)抗原抗體Human NOB1 去甲腎上腺(NA)
微桿菌Microbacterium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:pH指示劑羥基積雪草
紅曲霉Monascus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:pH指示劑積雪草
紅球菌Rhodococcus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T)羥基積雪草
caspase-3激活劑(細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)膜醭畢赤酵母 1,3-二乙?;桨籽∫种埔蜃?/span>
松口蘑 6-咪唑并[1,2-b]噠半胱蛋白1
少根根霉 2-甲基-4-基-1,3-氧硫雜環(huán)己烷半胱蛋白12
歧異假絲酵母 二甲基膦半胱蛋白3
香菇 2,2’-二溴-9,9’-螺二芴半胱蛋白8
粘金黃桿 甲基化鎂 溶液半胱蛋白9
金黃色葡萄球 2,3-二氟-4-羥基苯甲半胱蛋白抑制劑;胱抑C
節(jié)桿 3-巰基-2-戊酮半胱氨酰白三烯
片球?qū)?/span> 反-N,N'-二甲基環(huán)己烷-1,2-二半胱氨酰白三烯受體2
小孢盤多毛孢 4-溴-2,6-二氟苯半乳糖凝集3
枯草芽孢桿 (3,3,3-三氟基)二甲基硅烷胞漿型磷脂A2
中國考克娃酵母 4-氟-3-三氟甲苯羥化
黃曲霉 尿酰氟表皮生長因子
芽胞桿 4-羥基-6-甲基-2-吡喃酮氨基轉(zhuǎn)移
天白鏈霉 3,5-二苯
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