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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> Vps34抑制劑(Vps34-IN-1)
貨號(hào) | FS-X10509 |
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中文名稱:Vps34抑制劑(Vps34-IN-1)
英文名稱:Vps34-IN-1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10509
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Vps34-IN-1 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg Vps34-IN-1是Vps34的抑制劑,來自WO/2012085815A1,化合物實(shí)例16a;IC50值為4nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1383716-33-3 純度:99.64% 分子式:C??H??ClN?O 分子量:425.91 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
意大利酵母血栓A2受體抗體Anti-HNRNPL Antibody晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(AGER)
布魯氏菌 生物Ⅴ型Toll樣受體11抗體Anti-HOMER3 Antibody晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGE)
金霉鏈霉菌(生金色鏈霉菌)血小板反應(yīng)蛋白抗體Anti-HOXA10 Antibody烷基甘油單加氧(AGMO)
無端粒相關(guān)蛋白2/端粒逆轉(zhuǎn)錄抗體Anti-HOXA10 Antibody外周鞘磷脂蛋白22(PMP22)
圓酵母屬血小板反應(yīng)蛋白2/凝血敏感蛋白2抗體Anti-HOXA10 Antibody外周蛋白2(PRPH2)
白色彎曲嗜菌四分子交聯(lián)體17抗體(四旋蛋白)Anti-HOXA11 Antibody外周蛋白(PRPH)
赤霉屬髓系觸發(fā)受體1抗體Anti-HOOK2 Antibody外異蛋白A(EDA)
大腸埃希氏菌緊密連接蛋白2抗體Anti-HOOK3 Antibody外血小板溶1(EPPK1)
枝狀枝孢磷化埃茲蛋白抗體Anti-HOXA3 Antibody外生骨疣樣蛋白1(EXTL1)
節(jié)桿菌單克抗體Anti-HOXA4 Antibody外生骨疣蛋白2(EXT2)
冷海水黃桿菌微管相關(guān)蛋白α6抗體Anti-HOXA5 Antibody外生骨疣蛋白1(EXT1)
淡紫紫霉T淋巴轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子TFEB抗體Anti-HOXA6 Antibody外切體成分9(EXOSC9)
玉乳桿菌轉(zhuǎn)鐵蛋白單克抗體Anti-HOXA7 Antibody外切體成分8(EXOSC8)
鴨疫里氏桿菌促甲狀腺抗體Anti-HOXB9 Antibody外切體成分7(EXOSC7)
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)促甲狀腺單克抗體Anti-HP Antibody外切體成分6(EXOSC6)
皺木耳磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1Anti-HOXD11 Antibody外切體成分5(EXOSC5)
神經(jīng)突觸13抗體谷棒桿菌人神經(jīng)元細(xì)胞
多配體聚糖結(jié)合蛋白2抗體宇佐美曲霉變種人神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞
胞吐分泌蛋白Sec6抗體布氏乳桿菌人腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞
突觸結(jié)合蛋白11抗體乳桿菌屬人腦膜成纖維細(xì)胞
Vps34抑制劑(Vps34-IN-1)醋桿屬 5-羥基-2-甲球蛋白G2a
熱小鏈地芽孢桿 1,1′-雙(二異基膦基)二茂鐵二化鈀球蛋白M
松針層孔* 乙烯基二苯基膦凝聚
豇豆慢生根瘤 3,5-二甲基-4-甲氧基Ⅷ
蘋果鏈格孢 硫化銀皮質(zhì)
弗雷德里克斯堡假單胞 Mianserin HCl熱休克蛋白96
蘇云金芽孢桿 倍他松 17-戊酯絨毛膜促性腺
光伏希瓦氏 2,3-二氟苯甲三葉因子3
假單胞 2-溴-1,3,5-三異基苯腎損傷分子1
乳桿屬 2,5-二羥基甲酯松弛肽;松弛
細(xì)鏈格孢 3,5-二羥基甲酯外源性α干擾
孟氏假單胞 3,4-二甲氧基甲酯外源性γ干擾
異常漢遜酵母 6-二氟-4-羥基信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子1
貪噬 2-氨基-6-雄
棒桿屬 2-溴吡啶-5-頻哪酯循環(huán)復(fù)合物
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