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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞組織染色>> 細胞膜橙紅色熒光探針(DiI)
| 貨號 | FS-X9821 |
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產品介紹:
長鏈二烷基羰花青化合物，特別是Dil（分子量933.88），廣泛應用于固定和非固定的組織與細胞中，進行順行或逆行的神經示蹤分析。 Dil 不會影響細胞的活力、生長以及基本生理特性。Dil 標記運動神經元，可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長達四周，在體內長達一年。染料通過在質膜中的緩慢橫向擴散均勻標記神經元，0.2~0.6mm/每天/固定標本，在活體組織里，可以達到6mm/每天。經過醛固定的組織，Dil 的擴增可以持續(xù)長達1~2 年。一般情況下未標記的染料不會向非標記的細胞轉移，除非質膜被破壞，比如切片部位。 儲存：-20℃，避光，有效期12個月。 |
中文名稱：細胞膜橙紅色熒光探針(DiI)
英文名稱：DiI
產品規(guī)格：10mg
貨號：FS-X9821
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
Mdm2p53結合蛋白同源物(MDM2)英文名：MDM2 磷化半胱蛋白9抗體包裝1g
M2-型激(PKM2)英文名：PKM2 磷化半胱蛋白9抗體包裝250mg
L-型電壓依賴性鈣離子通道α1D亞基(CACNα1D)英文名：CACNα1D 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝5g
L-型電壓依賴鈣離子通道α1S亞基(CACNα1S)英文名：CACNα1S 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝1g
L-型電壓依賴鈣離子通道α1F亞基(CACNα1F)英文名：CACNα1F 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝5g
L-型電壓依賴鈣離子通道α1C亞基(CACNα1C)英文名：CACNα1C 磷化β 連環(huán)蛋白抗體包裝5g
Lin-28同源物A(LIN28A)英文名：LIN28A 造血干抗原CD133抗體包裝50mg
L1-細胞粘附分子(L1CAM)英文名：L1CAM 1號染色體開放閱讀框138抗體包裝100mg
Kruppel樣因子1(KLF1)英文名：KLF1 6號染色體開放閱讀框50抗體包裝1g
Klotho蛋白(KL)英文名：KL 1號染色體開放閱讀框151抗體包裝25ml
Klothoβ蛋白(KLβ)英文名：KLβ 腫瘤壞死因子受體超家族成員9抗體包裝5ml
Ki-67蛋白(Ki67P)英文名：Ki67P 復合前列腺特異性抗原單克抗體包裝100g
JunB原癌基因(JUNB)英文名：JUNB 組織蛋白z抗體包裝25g
Jagged1蛋白(JAG1)英文名：JAG1 2號染色體開放閱讀框84抗體包裝1g
IL2誘導T細胞激(ITK)英文名：ITK 磷化鈣/鈣調依賴蛋白激2α抗體包裝1g
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規(guī)格：HPLC>99%,標準品乙型肝炎病核心抗體IgM試劑盒鹽甜菜堿;Betaine hydroc
雜色曲霉原變種Aspergillus│versicolor var. versicolor 質量規(guī)格：>99%,BR乙型肝炎病核心抗體IgG試劑盒鹽吐根酚堿;Cephaeline hy
弓形蟲(GJS－4株)Toxoplasma│gondii 質量規(guī)格：HPLC>99%,標準品乙型肝炎病核心抗體試劑盒α-亞油;α-Linoleic aci
細胞膜橙紅色熒光探針(DiI)紅色紅曲 3-甲氧基-4-氧代-1-羧叔丁酯反狀腺原
平菇(江都156) 抗氧劑 702補體因子H相關蛋白1
Pseudomonas entomophila L48 DL-氨酰甘C1q腫瘤壞死因子相關蛋白3
產紫青霉 2-氨基-4-羥基吡啶鹽鹽14－3－3蛋白
植物乳桿 酮基丁二二乙酯流行性乙型腦炎病IGM抗體
椿象紅球 2-氟-6-(2H-1,2,3-噻唑-2-基)尿糖
沙場鏈霉 四乙基醋琥珀酰合成
糞腸球 2-氨基-噻唑-4-甲酰亞硝鹽
短密青霉 2-氨基-3,6-二氟甲酯周期依賴性激4
交鏈孢 Bz-rC亞磷酰單體乙肝兩對半
巨大芽孢桿 2-羥基-5-鹽鹽肌球蛋白輕鏈激
匯合海桿 4-溴-3,5-二三葉因子
釀酒酵母 2-氨基-4,7-二氫噻吩[2,3-C]吡喃-3-羧乙酯8-氧鳥
粉紅擲孢酵母 N-叔丁氧羰基吡咯-2-甲有機陰離子轉運多肽
Marisediminicola 3-(N-Boc-氨甲基)OATP1B3
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