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貨號 | FS-X10660 |
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中文名稱:MDM2抑制劑(RG7112)
英文名稱:RG7112
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10660
產(chǎn)品介紹:
RG7112是臨床上第一個MDM2抑制劑,Kd值為11nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:939981-39-2 別名:RO5045337 純度:99.94% 分子量:727.78 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
火紅色紅曲菌Alexa Fluor 350標記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody脫氫(CHDH)
白黃阮繼生氏菌Alexa Fluor 488標記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody磷轉(zhuǎn)移1(CHPT1)
短芽孢桿菌羅丹明標記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2 Antibody/乙磷轉(zhuǎn)移1(CEPT1)
傘菌假單胞菌辣根過氧化物標記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2B Antibody膽固-25-羥化(CH25H)
泡囊短波單胞菌FITC標記的兔抗大鼠IgGAnti-WNK1 Antibody單酰甘油脂肪(MGL)
雞新城疫血凝抑制試驗用抗原(國家參考品)膠體金標記的兔抗大鼠IgGAnti-Wnt2b Antibody單酰甘油-O-酰基轉(zhuǎn)移3(MOGAT3)
副短短芽孢桿菌堿性磷(AP)標記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT2B Antibody單酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移2(MOGAT2)
少根根霉PE-Cy7標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3 Antibody單酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移1(MOGAT1)
嗜熱脂肪地芽胞桿菌(Geobacillus stearothermophilus )ATCC 7953 *Alexa Fluor 488標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT4 Antibody單鏈選擇性單功能DNA糖基化1(SMUG1)
豬瘟病間接ELISA抗體Alexa Fluor 555標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3A Antibody單核趨化蛋白4(MCP4)
細麗擬盤多毛孢Alexa Fluor 647標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT3A Antibody單核趨化蛋白3(MCP3)
釀酒酵母PE-Cy5.5標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT4 Antibody單核趨化蛋白2(MCP2)
花楸盤多毛孢APC標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT5A Antibody單核趨化蛋白1(MCP1)
果生鏈核盤菌Alexa Fluor 350標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT5A Antibody(PB0087)單核巨噬分化關(guān)聯(lián)蛋白(MMA)
厄氏菌羅丹明標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT7A Antibody戴帽蛋白肌Z系β(CAPZβ)
核盤菌FITC標記的兔抗大鼠IgMAnti-WNT7B Antibody帶粘蛋白(ZAN)
前列腺性磷抗體黑根毛霉小鼠冠狀動脈組織提取物
乳腺癌相關(guān)蛋白DRES17抗體隱甲藻小鼠牙乳頭組織提取物
輔肌動蛋白相關(guān)LIM蛋白抗體浮游球衣菌小鼠內(nèi)臟脂肪組織提取物
親環(huán)蛋白親環(huán)PPIB抗體Sphingobacteriumcomposti小鼠胎兒表皮組織提取物
MDM2抑制劑(RG7112)白僵 N,N-二甲基間羥基苯一氧化氮
玫瑰庫克氏 2-吡啶甲一氧化氮合成
葉居 2-吡羧胰島
茶褐針層孔 叔丁基 2,2,2-三乙酰亞酯胰島樣生長因子1
豕鏈球 (1R,2S)-(-)-反-2-苯基-1-環(huán)己胰高血糖
擬卵蓋鵝膏 苯乙酰羧化
大腸埃希氏 4-甲氧基苯磺酰異檸檬裂解
鐮刀 4-羥基苯磺水合物抑制B
三葉草根瘤 4-羥基苯磺水合物硬脂酰去飽和
Chitinophaga pinensis 4-苯磺水合物硬脂酰去飽和1
墨西哥假黃單胞 2'-氟-4'-羥基苯乙酮游離脂肪
膠孢 4-苯磺酰誘導型NO合
居成團玫瑰變色 4-甲硫基苯原纖維蛋白-1
豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS24 對叔丁苯孕酮
栗酒裂殖酵母 2-氨基-3-溴-4-載脂蛋白B100
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