操作步驟:

(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時(shí)，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗(yàn)證敲減/過表達(dá)效率。

商品介紹：

細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：
(1)  細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時(shí)方法和平時(shí)一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí)，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒 ，英文名： M2-PK ELISA Kit

Mouse alpha L fucosidase (AFU) ELISA Kit 小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒

ELISA 小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽-78(mouse ENA-78) 48T/96T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforKLK11(HumanKallikrein11)ELISAKit人釋放酶11規(guī)格：48T/96T

通用型腸桿菌(EerobacteriaceaSTX2)試劑盒20次

小鼠免疫球蛋白G3(IgG3)ELISA試劑盒 ，英文名： IgG3 ELISA Kit

人抗滋養(yǎng)膜細(xì)胞抗體(ATA)ELISA檢測試劑盒Humanai-ophoblastaibody,ATAELISAKit 96T/48T

大鼠胰島素樣生長因子1(IGF-1)免疫試劑盒 Rat Insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISA Kit

英文名稱Human14-3-3proteinELISAKit人14-3-3蛋白(14-3-3pro)規(guī)格：96T/48T

糞便細(xì)菌DNA分

兔白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA 試劑盒

Human insulin receptor beta (ISR- beta) ELISA Kit 人胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒

HumanlisteriolysinELISAKit 人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素(listeriolysin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanglycophosphatidylinositol,GPIELISA試劑盒人糖0脂酰肌醇(GPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織蛋白巰

倉鼠腎成纖維細(xì)胞；BHK小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA 試劑盒

Rat vitamin K1 (VK1) ELISA Kit 大鼠K1(VK1)ELISA試劑盒

Humanacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit 人乙酰受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancommonacelymphocyticleukaemiaaigen,CALLAELISA試劑盒人普通急性淋巴細(xì)胞白血病抗原(CALLA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

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