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貨號(hào)	FS-X10701

產(chǎn)品介紹:

Deforolimus是一種有效和選擇性mTOR抑制劑，在HT-1080細(xì)胞中抑制S6磷酸化的IC50值為0.2nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：572924-54-0

別名：AP23573;MK-8669;Ridaforolimus

純度：98.46%

分子量：990.21

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：mTOR抑制劑(Deforolimus)

英文名稱：Deforolimus

產(chǎn)品規(guī)格：10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10701

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

香菇角蛋白18抗原（C端）Anti-CDH7 Antibodyp53上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)因子(PUMA)

彩色豆馬勃角蛋白14抗原Anti-CDH6 Antibodyp21蛋白激活激4(PAK4)

解淀粉芽胞桿菌角蛋白16抗原Anti-CDK10 AntibodyO-巖藻糖肽3-β-N-乙?；咸烟寝D(zhuǎn)移(RFNG)

蠟狀芽孢桿菌角蛋白17抗原Anti-CDK1 AntibodyO-唾液糖蛋白內(nèi)肽(OSGEP)

黑木耳角蛋白1/8/19抗原Anti-CDH9 AntibodyOtubain2蛋白(OTUB2)

微球菌角蛋白2抗原Anti-CDH8 AntibodyOtubain1蛋白(OTUB1)

枯草芽孢桿菌角蛋白5抗原Anti-CDK11B AntibodyOsterix蛋白(OSX)

忠清南道鹽單胞菌角蛋白7抗原Anti-CDK1 AntibodyOpiorphin蛋白(OPI)

芽孢桿菌角蛋白8（多肽）Anti-CDK2 AntibodyO-6-甲基鳥DNA甲基轉(zhuǎn)移(MGMT)

綠木霉酪蛋白激2相互作用蛋白1抗原Anti-CDK20 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移9(NAT9)

慕尼黑分枝桿菌鈣激活離子通道4抗原Anti-CDK2AP1 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移8樣蛋白(NAT8L)

枯草芽孢桿菌c-mer原癌基因酪激抗原Anti-CDK2AP2 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移8B(NAT8B)

豬丹絲菌c-Myc tag標(biāo)簽多肽Anti-CDK2AP1 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移8(NAT8)

魯氏毛霉AU5 tag標(biāo)簽抗原Anti-CDK5R2 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移6(NAT6)

淺黃色假單胞菌AU1 tag標(biāo)簽多肽Anti-CDK5R1 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移5(NAT5)

絲球毛霉Glu-Glu Tag多肽蛋白Anti-CDK5RAP2 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移2(NAT2)

原鈣粘蛋白γB6抗體肺炎鏈球菌小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞

原鈣粘蛋白γC3抗體化膿性鏈球菌人外周血單核細(xì)胞

原鈣粘蛋白γC4抗體陰溝腸桿菌陰溝亞種小鼠肺泡巨噬細(xì)胞

妊娠區(qū)帶蛋白PZP抗體嗜熱脂肪地芽孢桿菌人皮膚成纖維細(xì)胞
mTOR抑制劑(Deforolimus)孟氏假單胞三苯基鉍肌酐

綠粘帚霉 1,1'-聯(lián)-2-萘肌酐

黑曲霉 (R)-(-)-2,3-二氨基鹽鹽一氧化氮合成

短波單胞對(duì)氨基水楊鈉脂肪

地衣芽孢桿對(duì)氨基偶氮苯主要組織相容性復(fù)合體

土壤成對(duì)桿三叔丁骨成型蛋白

枯草芽孢桿 2,3-戊二酮氨基

冷桿屬 4-肉桂抗壞血

葡萄座腔 D-(-)-泛酰內(nèi)酯Bcl2樣蛋白11

玉大斑 N,N-二甲基乙一磷腺

鮑魚側(cè)耳甲基脲谷氨酰半胱合成

農(nóng)藥殘留速測(cè)儀（農(nóng)卡） 4-溴-2-甲氧基苯c-Jun氨基末端激1

香菇 D-叔丁酯鹽鹽凋亡誘導(dǎo)因子

腐皮鐮孢二巰基腺病1型

丁香暗黃鏈霉 2-苯并惡唑啉酮腺病2型

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