SP600125 (JNK抑制劑)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10248

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：SP600125 (JNK抑制劑)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：5mg

貨號(hào)：FS-X10248

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：5mg

SP600125是一種廣譜JNK 抑制劑，作用于JNK1， JNK2和JNK3時(shí)，IC50分別為40nM，40nM 和90nM，比作用于MKK4選擇性高10倍，比作用于MKK3， MKK6， PKB，和PKCα選擇性高25倍，比作用于ERK2，p38，Chk1，EGFR 等選擇性高100倍。

SP600125是絲/蘇氨suan激酶廣譜抑制劑，有效抑制c-Jun 氨基末端激酶(JNK)。

儲(chǔ)存：-20℃，有效期36個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

棲藻海桿狀菌心肌肌球蛋白重鏈抗體Human SGLT3/SLC5A4 大鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒

芥黃蜜環(huán)菌HECT E3泛鏈接抗體Human SFXN1 大鼠3氧代5α類固4脫氫2(SRD5A2)免疫試劑盒

多主葡萄殼菌組蛋白去乙?；?/span>11抗體Human SFT2D3 大鼠3-硝基酪(3-NT)免疫試劑盒

根瘤菌磷化荷爾蒙敏感脂肪抗體Human SFXN2 大鼠3-羥基-3-甲基戊二酰合(HMGCS)免疫試劑盒

松生擬層孔菌HHO1蛋白抗體Human SH3BP5 大鼠3-O-多巴(3-OMD)免疫試劑盒

Stenotrophomonas rhizophila磷化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γ抗體Human SH3BP4 大鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)免疫試劑盒

玫瑰考克氏菌磷化荷爾蒙敏感脂肪抗體Human SH2B1 大鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒

菜豆根瘤菌磷化組蛋白H1.4抗體Human SH3D19 大鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒

巨孢鏈霉菌羥酰水解蛋白抗體Human SH2D2A 大鼠26S蛋白體(26S PSM)免疫試劑盒

短柄帚霉磷化組蛋白去乙酰化5抗體Human SH2D1A 大鼠25羥基維生D3(25 HVD3)免疫試劑盒

玉大斑病菌人巨病抗體Human SH2D1B 大鼠20S蛋白體(20SP)免疫試劑盒

糞腸球菌磷化組蛋白去乙?；?/span>4/5/7抗體Human SH2D3A 大鼠2,3-二磷甘油(2,3-DPG)免疫試劑盒

屎腸球菌磷化HER2受體抗體Human SH2D3C 大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)免疫試劑盒

檸條根瘤菌磷化荷爾蒙敏感脂肪抗體Human SFRS8 大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒

畢赤酵母肝癌上調(diào)蛋白抗體Human SGLT3/SLC5A4 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒

EscherichiaHRAS樣抑制因子3抗體Human SFRS9 大鼠Ⅰ型前膠原(PCⅠ)免疫試劑盒

淡紫擬青霉Paecilomyce│lilacinus 質(zhì)量規(guī)格：0.105mg/ml三葉豆紫檀

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：0.100mg/ml乙酰紫堇靈

銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品異槲皮
SP600125 (JNK抑制劑)Cyberlindnera 2,4,5-三氨基-6-羥基嘧啶硫鹽D-木糖

水生異常球 5--2-三氟乙酰轉(zhuǎn)移

稻黃桿 3,4-二苯甲酰甲乙酯鼠相關(guān)蛋白

產(chǎn)黃青霉 4-苯甲酰甲乙酯CD80分子

草木樨中華根瘤 2-氨基-4-三氟甲基-1,3-噻唑CD28分子

細(xì)黃鏈霉 3-溴-4-甲CD25分子

湖北擬酵母 2--4-甲程序性死亡-1

NRRL B-2354 屎腸球（現(xiàn)2） 2-氟-4-甲前蛋白轉(zhuǎn)化枯草溶9

蘋果輪紋病丁狂犬病抗體

灰色鏈霉灰色亞種 4-甲酯甲狀腺過氧化物

澤普林假絲酵母甲對(duì)溴苯酯UDP-N-乙酰氨基葡萄糖肽N-乙酰葡糖氨基轉(zhuǎn)移110kDa亞基

羅氏鏈霉 4-芐基嗎啉-2-羧氧化型過氧化物

金黃色葡萄球溴美噴酯UDP-N-乙?；咸烟?/span>

總狀毛霉 3,4-二氟苯甲酰骨退化特異標(biāo)志物

枯草芽孢桿 1-金剛烷轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a1
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)