VCP/p97抑制劑(NMS-873)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10591

產(chǎn)品介紹:

nMS-873是一種有效的，選擇性的VCP/p97抑制劑，在1mM ATP條件下，IC50值為20nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1418013-75-8

純度：99.93%

分子量：520.67

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：VCP/p97抑制劑(NMS-873)

英文名稱：NMS-873

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10591

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

紅球菌絲蛋白抑制劑B11抗體Anti-PPBP Antibody金屬硫蛋白4(MT4)

中山小短桿菌絲蛋白抑制劑B3抗體Anti-PPBP Antibody金屬硫蛋白3(MT3)

肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種絲/蘇蛋白激SIK2抗體Anti-PPCS Antibody金屬硫蛋白1X(MT1X)

詹氏桿菌神經(jīng)元特異性蛋白3抗體Anti-PPBP Antibody金屬硫蛋白1M(MT1M)

非無菌藥品需氧菌總數(shù) 豬霍亂沙門氏菌抗體Anti-PPBP Antibody金屬硫蛋白1L(MT1L)

釀酒酵母增殖誘導(dǎo)蛋白54抗體Anti-PPIA Antibody金屬硫蛋白1H(MT1H)

Maribius salinus沙門氏菌抗體（多型）Anti-PPIB Antibody金屬硫蛋白1G(MT1G)

雞傷門氏菌鼠傷門氏菌Anti-PPID Antibody金屬硫蛋白1F(MT1F)

大腸埃希氏菌甲型副傷門氏菌抗體Anti-PPID Antibody金屬硫蛋白1E(MT1E)

釀酒酵母絲/精相關(guān)核基質(zhì)蛋白1抗體Anti-PPIB Antibody金屬硫蛋白1B(MT1B)

斯托克青霉絲/精相關(guān)核基質(zhì)蛋白2抗體Anti-PPID Antibody金屬硫蛋白1(MT1)

雙歧雙歧桿菌鴨沙門氏菌抗體Anti-PPIG Antibody金屬磷酯1(MPPE1)

梅氏弧菌轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DEC2抗體Anti-PPL Antibody金屬泛激蛋白1(MPS1)

總狀共頭霉鞘激2抗體Anti-PPM1A Antibody解整合金屬蛋白9(ADAM9)

果生鏈核盤菌絲/蘇蛋白激3抗體Anti-PPM1D Antibody解整合金屬蛋白8(ADAM8)

纖維単胞菌鏈親和抗體Anti-PPM1E Antibody解整合金屬蛋白33(ADAM33)

乙?；D(zhuǎn)移10抗體Chitinophagarupis小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞提取物

絲/蘇蛋白激Nek7抗體Deinococcusaquatilis小鼠滑膜細(xì)胞提取物

神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)蛋白1抗體Chitinophagapinensis小鼠骨骼肌細(xì)胞提取物

絲/蘇蛋白激NEK1抗體紫色色桿菌小鼠成骨細(xì)胞提取物
VCP/p97抑制劑(NMS-873)彎孢 (R,R)-(-)-N,N′-雙(3,5-二叔丁基亞水楊基)-1,2-環(huán)已二β內(nèi)酰

香栓 (S,S)-(+)-N,N′-雙(3,5-二-叔丁基亞水楊基)-1,2-環(huán)已二線粒體呼吸鏈復(fù)合物II

耐久腸球 N-芴甲氧羰基-N'-三苯甲基-D-組維甲結(jié)合蛋白

豌豆根瘤化羅丹明110保幼二激

雷蘑吖啶黃G己糖激

枇杷炭疽病 2,4-二-5-嘧啶滯育

大腸埃希 6-三氟甲基保幼二激

乳乳球乳亞種化銩(III)無水色

根瘤溴化釹(III)甘露糖-6-P異構(gòu)

Marisediminicola 溴化鐠(III)GDP-D-甘露糖焦磷化

長孢黃色鏈霉 3-氨基-5-溴吡啶磷甘露糖變位2

核盤 4-氨基-3-溴吡啶乙酰

瓜枝孢（黃瓜黑星?。?/span> 磷二氫鋁纖維蛋白溶

繩狀曲霉 1,2-雙(二甲基硅烷基)乙烷β-N-乙酰葡萄糖糖

大腸埃希溴化釤(III)，六水絲；蘇蛋白激3

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