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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 泛class IPI3K抑制劑
貨號(hào) | FS-X10326 |
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中文名稱(chēng):泛class IPI3K抑制劑
英文名稱(chēng):NVP-BKM120
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號(hào):FS-X10326
產(chǎn)品介紹:
英文名稱(chēng):NVP-BKM120 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg NVP-BKM120是一種泛class IPI3K抑制劑,作用于p110α/p110β/p110δ/p110γ,IC50分別為52nM/166nM/116nM/262nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):944396-07-0 別名:Buparlisib;BKM120 純度:99.68% 分子量:410.39 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
類(lèi)干酪乳桿菌凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激1抗體Human NUDCD3 軟骨糖蛋白39(HC gp-39)
抗生鏈霉菌NFKB激活蛋白1抗體Human GNRH1(Progonadoliberin-1) 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)
熒光假單胞菌磷化Myc基因相關(guān)X因子抗體Human NUDT10 軟骨寡聚蛋白(COMP)
出芽短梗霉亞甲基四氫葉還原MTHFR抗體Human NUDT11(Diphosphoinositol polyphosphate phosphohydrolase 3-beta) 乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)
香菇MEK1/MAPKK1抗體(N-端)Human NUDT16 癌易感蛋白2(BRCA-2)
三隔鐮刀菌褪黑受體1B抗體Human NUDT12 癌易感蛋白1(BRCA-1)
天格爾黃桿菌多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體Human NUDT19 乳鐵蛋白(LTF)
柑橘藻斑病*多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體Human NUDT2 乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG(LF/LTF Ab-Ig)
紡錘形賴(lài)芽孢桿菌線(xiàn)粒體內(nèi)膜蛋白抗體Human NUDT2 乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)
空泡單胞菌基質(zhì)金屬蛋白-8/膠原2抗體Human NUDT16 乳糖凝集8(LGALS8)
地衣芽孢桿菌基質(zhì)金屬蛋白11抗體Human NUAK2 乳脫氫A(LDHA)
食蔗糖葡糖醋桿菌基質(zhì)金屬蛋白-12抗體Human NUAK2 乳脫氫(LDH)
釀酒酵母基質(zhì)金屬蛋白-15抗體Human NUDT19 乳清磷核糖轉(zhuǎn)移(OPRT)
炭疽沉淀血清基質(zhì)金屬蛋白-16抗體Human NUB1 乳過(guò)氧化物(LPO)
膠胞(可訂購(gòu))基質(zhì)金屬蛋白-17抗體Human NUDT21 肉瘤抗原1(SAGE1)
皮落青霉膜突蛋白抗體Human NUBP2(Nucleotide-binding protein 2) 肉堿脂酰轉(zhuǎn)移(CACT)
嗜熱脂肪地芽抱桿菌Geobacillus│stearothermophilus 質(zhì)量規(guī)格:藥物研究配體五味子
南瓜細(xì)基格孢Ulocladium│cucurbitae 質(zhì)量規(guī)格:藥物研究配體五味子乙
傳染性支氣管炎病毒Coronavirus│Infectious bronchitis virus 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(N)五味子
泛class IPI3K抑制劑秦氏蜜環(huán) L-亮氨酰甘阿立新A
草生毛霉 茶樹(shù)油癌胚抗原
芽孢桿屬 2-氨基-3-吡氨酰磷合成I
龍舌蘭盤(pán)孢 3-羥基氨基脲敏感性氧化
鏈孢囊 2-羥基-5-硝基煙白蛋白
黑曲霉 2-溴-2′-乙酮白蛋白
玫瑰暗黃鏈霉 4--7-甲氧基喹啉白介-18結(jié)合蛋白
地中海中慢生根瘤* 乙酰酮鎂白介1α
扣囊復(fù)膜孢酵母 1,3-二乙烯基-1,1,3,3-四甲基二硅氧烷鉑(0)白介2受體
鼠李糖乳桿 2-溴甲基-6-白念珠烯化
紅城紅球 聚氧化乙烯白三烯B4
根瘤 聚氧化乙烯白三烯B5
熱帶假絲酵母 聚氧化乙烯白三烯C4
大腸埃希氏定量質(zhì)控株* 聚氧化乙烯白三烯D4
群結(jié)腐霉 聚氧化乙烯白介1
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