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貨號	FS-X9805

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：茜素紅染色試劑盒(ph8.3)

英文名稱：Mordant Red 3

產(chǎn)品規(guī)格：10ml

貨號：FS-X9805

產(chǎn)品介紹:

茜素紅S 是一種蒽醌衍生物：9,10-二氫-3,4-二羥基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸單鈉鹽，又稱媒介紅3或茜素磺酸鈉。其分子式為C14H7NaO7S，分子量為342.25。茜素紅和鈣離子以鰲和方式形成復(fù)合物，用以識別組織細(xì)胞的鈣鹽成分。鈣鹽變化是骨細(xì)胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標(biāo)志之一。通過茜紅素染色，產(chǎn)生桔紅色沉積，但會受到其它金屬元素的干擾。

本產(chǎn)品pH8.3 主要適用于動物原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的鈣沉積和鈣化結(jié)節(jié)檢測。廣泛用于骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。

注意：以6 孔板為例，每孔孵育的染色工作液為500μL，本試劑盒可以做20tests；以普通切片和96 孔細(xì)胞為例，每張玻片孵育的染色工作液為100μL，本試劑盒可以做100tests。

儲存：2-8℃，避光，有效期3個月。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蛋白激Cα(PKCα)英文名：PKCα 殺菌肽B/天蠶抗菌肽B抗體包裝200mg

蛋白激Bγ(PKBγ)英文名：PKBγ 碳酐13抗體包裝1g

蛋白二硫化物異構(gòu)A4(PDIA4)英文名：PDIA4 離子通道蛋白5抗體包裝250mg

蛋白二硫化物異構(gòu)A2(PDIA2)英文名：PDIA2 軸突相關(guān)粘附分子抗體包裝5g

蛋白Z(PROZ)英文名：PROZ 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD1抗體包裝50MG

蛋白C(PROC)英文名：PROC ATP依賴的解旋CHD3抗體包裝1g

蛋腺轉(zhuǎn)移Ⅰα(MAT1α)英文名：MAT1α 碳酐7抗體包裝250mg

彈性蛋白微原纖維界面因子2(EMILIN2)英文名：EMILIN2 膠原蛋白和鈣結(jié)合表皮生長因子結(jié)構(gòu)域1抗體包裝5g

彈性蛋白4(ELA4)英文名：ELA4 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體包裝1g

彈性蛋白(ELN)英文名：ELN 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白16抗體包裝5g

膽囊收縮八肽(CCK8)英文名：CCK8 色B還原1抗體包裝1g

膽囊收縮B受體(CCKBR)英文名：CCKBR 2號染色體開放閱讀框76抗體包裝5g

膽囊收縮A受體(CCKAR)英文名：CCKAR 3號染色體開放閱讀框19抗體包裝50mg

單核細(xì)胞趨化蛋白5(MCP5)英文名：MCP5 色c氧化5A抗體包裝10g

單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP3)英文名：MCP3 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白60抗體包裝50g

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品游離脂肪試劑盒L-異亮;L-Isoleucine

谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質(zhì)量規(guī)格：>99%,III型游離原卟啉試劑盒銀杏內(nèi)酯J;Ginkgolide J

煙曲霉Aspergillus│fumigatus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品游離血紅蛋白試劑盒氧化石蒜堿;Lycobetaine
茜素紅染色試劑盒(ph8.3)枯草芽孢桿甲磺去鐵粉塵螨特異性IgG4抗體

釀酒酵母 N-Boc-D-beta-脯氨Ca-Mg-ATPase

大腸埃希 4-[(甲基氨基)甲基]-1-甲叔丁酯尿鹽轉(zhuǎn)運蛋白1

黑腐皮殼四(乙氨基)鋯短鏈脂肪

短密籃狀 2,5-二對苯二甲醋甲

假單胞屬 1-(3-乙基-4-羥甲基）苯乙酮塞卡病

沙地海源 2-氟-6-甲氧基色b5

釀酒酵母 2-氟-3-甲氧基谷氨酰半胱連接催化亞基

傳染性支氣管炎病鉻鈣 (metals basis)谷氨酰半胱連接調(diào)控亞基

莫拉卡他莫拉利度合成

Pseudomonas 5,7-二羥基-2,2-二甲基-4H-1,3-苯并二氧雜環(huán)己-4-酮精合成

黃硬皮馬勃 4,5-二氨基嘧啶磷化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激結(jié)合蛋白3

鍺栓孔 1-芐基-2-甲基咪唑血凝;凝集

圍小叢殼 4--3-氟苯水痘-帶狀皰疹病

東方擬無枝 4-溴-1H-吡唑-3-甲鉤端螺旋體抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)