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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> PD 98,059(MAPKK抑制劑)
貨號(hào) | FS-X10246 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱(chēng): 產(chǎn)品規(guī)格:2mg PD98059是一種非ATP 競(jìng)爭(zhēng)性的MEK 抑制劑,IC50為2 μM,特異性抑制MEK-1介導(dǎo)的MAPK 激活;不直接抑制ERK1或ERK2。 |
中文名稱(chēng):PD 98,059(MAPKK抑制劑)
英文名稱(chēng):
產(chǎn)品規(guī)格:2mg
貨號(hào):FS-X10246
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
香栓菌Hib乙酰水解抗體Human MUC20(Mucin-20) 大鼠Bκ輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子α(NFKBIA)免疫試劑盒
少根根霉原變種腫瘤異常甲基化蛋白1抗體Human SKAP2 大鼠Bκ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)免疫試劑盒
芽孢桿菌腫瘤異常甲基化蛋白2抗體Human SIGMAR1 大鼠B-淋巴趨化因子1(BLC-1/CXCL13)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌缺氧誘導(dǎo)因子脯酰羥化4抗體Human SIL1 大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)免疫試劑盒
少根根霉人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病膜糖蛋白2抗體Human SIKE1 大鼠Bcl-2樣蛋白1(Bcl2-L-1/Bcl-X)免疫試劑盒
蟲(chóng)草Beta基己糖beta亞基蛋白B鏈抗體Human SHOX 大鼠ATP1B4蛋白(ATP1B4)免疫試劑盒
黃曲霉HEXIM2蛋白抗體Human SIM2 大鼠Apelin(APLN)免疫試劑盒
松果鏈霉菌3'-5'外切1蛋白抗體Human SHMT2 大鼠apelin 13(AP13)免疫試劑盒
黑馬朗假絲酵母型肝炎病NS5B抗體Human SHROOM1 大鼠apelin 12(AP12)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌缺氧誘導(dǎo)基因1C蛋白抗體Human SH3GL3 大鼠Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)免疫試劑盒
間型假絲酵母HEG同源蛋白1抗體Human MUC20(Mucin-20) 大鼠ADM2(ADM2)免疫試劑盒
雷丸菌人腫瘤抑制蛋白抗體Human SHANK1 大鼠8異前列腺F2α(8-iso-PGF2a)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種Hemk甲基轉(zhuǎn)移家族1號(hào)蛋白抗體Human SH3GL2 大鼠8異前列腺(8-iso-PG)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌Hemk甲基轉(zhuǎn)移家族2號(hào)蛋白抗體Human SH3PXD2A 大鼠8-異構(gòu)前列腺F2α(8-epi-PGF2α)免疫試劑盒
石楠炭疽病菌HEN1甲基轉(zhuǎn)移同源蛋白1抗體Human SHARPIN(Sharpin) 大鼠8羥基脫氧鳥(niǎo)(8-OHdG)免疫試劑盒
白假絲酵母缺氧誘導(dǎo)基因2蛋白抗體Human SHD 大鼠Ⅵ型膠原(Col Ⅵ)免疫試劑盒
產(chǎn)堿假單胞菌Pseudomonas│alcaligenes 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%原花青B2
沃氏富鹽菌Haloferax│volcanii 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%澤瀉B醋酯
谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6%肉豆蔻木脂
PD 98,059(MAPKK抑制劑)褐孢大禿馬勃 3-氨基-2,6-二氟甲酯分泌型球蛋白E
微小桿 3--4-三氟甲基芐草酰乙
香菇 N-羥基叔丁酯β-防御2
鏈霉 6-甲甲酯生物
矮小傘枝霉 3--2-羧甲酯球蛋白EFc段受體I
大腸埃希 1,4-苯二乙二乙酯甘油三脂
單梗頭孢霉屬 甲基谷胎球蛋白B
毛尖蘑 cortienic acid乙腦特異性抗體
Virgibacillus 3-基-4-孔肯尼亞病抗體
綠色木霉 7--1H-吡咯并[3,2-b]吡啶蛋白激A
枯草芽孢桿 水楊基熒光酮諾如病
簡(jiǎn)單青霉 4--6,7-二甲氧基喹啉胱硫分解
釀酒酵母 八氟戊GRO;KC
釀酒酵母 全氟己烷β-羥丁
枯草芽孢桿 五氟血管緊張Ⅱ受體1
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