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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> USP7/USP47抑制劑(USP7/USP47 inhibitor)
貨號(hào) | FS-X10916 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
中文名稱:USP7/USP47抑制劑(USP7/USP47 inhibitor)
英文名稱:USP7/USP47 inhibitor
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10916
產(chǎn)品介紹:
USP7/USP47inhibitor是USP7/USP47的抑制劑,IC50分別為0.42uM和1.0uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1247825-37-1 純度:98.17% 分子量:484.4 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
類干酪乳桿菌人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3Anti-Wnt1 Antibody小鼠17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)
新疆黃桿菌人視黃結(jié)合蛋白Anti-WEE2 Antibody小鼠白介1α(IL-1α)
麥根腐平臍蠕孢人8羥基脫氧鳥Anti-WTAP Antibody小鼠白介1α(IL-1α)
綠僵菌人羥賴Anti-WRNIP1 Antibody小鼠白介2(IL-2)
擬青霉屬人GTP活化蛋白Anti-XPA Antibody小鼠白介2(IL-2)
副豬嗜血桿菌人載脂蛋白HAnti-XPA Antibody小鼠白介4(IL-4)
釀酒酵母人糖磷脂酰肌Anti-XPO4 Antibody小鼠白介4(IL-4)
變灰尾孢菌人美洲商陸Anti-XRCC2 Antibody小鼠白介6(IL-6)
雅氏艾美耳球蟲人脂多糖/內(nèi)Anti-XRCC6 Antibody小鼠白介6(IL-6)
彎曲芽胞桿菌人preptinAnti-XRCC6 Antibody小鼠白介9(IL-9)
球孢白僵菌人過(guò)氧化物體增殖物激活受體αAnti-YARS Antibody小鼠白介9(IL-9)
大腸埃希菌人載脂蛋白EAnti-XRN2 Antibody小鼠苗條受體(LR/Ob-R)
冬克青霉人成骨生長(zhǎng)肽Anti-YEATS2 Antibody小鼠苗條受體(LR/Ob-R)
Sphingomonas oligoaromativorans人破骨分化因子Anti-YBOX2 Antibody小鼠瘦(LEP)
枯草芽孢桿菌人羥基膠原吡啶交聯(lián)Anti-YOD1 Antibody小鼠瘦(LEP)
黑木耳人脫氧膠原吡啶交聯(lián)Anti-YTHDF1 Antibody小鼠白血病抑制因子(LIF)
癌基因VAV2抗體皺褶革菌中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞
囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)的蛋白B黃斑紅菇人類成纖維細(xì)胞系
絲/蘇特定蛋白磷抗體褐黃鱗銹耳大鼠肝細(xì)胞
血管生長(zhǎng)因子VG5Q抗體鉛色短孢牛肝菌小鼠X小鼠
USP7/USP47抑制劑(USP7/USP47 inhibitor)大腸埃希氏 銀、砷、鉍、鉻、銅、鐵、鎂、錳、鎳、鉛、鈀、銻、硅/Ag, As, Bi, Cr, Cu, Fe,過(guò)氧化物體增殖物激活受體
熒光假單胞 鋁、砷、鉍、鎘、銅、鐵、鉛、鈀、銻、硒、錫、碲、鋅/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe,核轉(zhuǎn)錄因子
變幻青霉 鋁、砷、鉍、鎘、銅、鐵、鉛、鈀、銻、硒、錫、碲、鋅/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe,8羥基脫氧鳥
Hypoxylon perforatum 銀、鋁、、鋇、鈣、、鋰、鎂、鈉、鎳、銻、硒、錫/Ag, Al, B, Ba, Ca, K, Li可溶性環(huán)氧化物水解
根霉 砷、鋇、鈷、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉛、錸、銻、硒、錫、碲/As, Ba, Co, Cr, Cu, Fe皮質(zhì)
委內(nèi)瑞拉鏈霉菊糖變 、鋇、鎘、鈷、銅、鐵、錳、鉬、鎳、鉛、銻、鈦、釩、鋅/B, Ba, Cd, Co, Cu, Fe,葡萄糖
裂褶 鋁、鈣、鉻、銅、鐵、鎂、錳、鉬、鈉、鎳、鉛、錫、釩、鋅/Al, Ca, Cr, Cu, Fe, Mg封閉蛋白
德?tīng)柌加墟邎A酵母 鋁、鈣、鎘、鉻、銅、鐵、、鎂、錳、鈉、鎳、鉛、釩、鋅/Al, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe補(bǔ)體蛋白3
糖化酵母 鋁、、鈣、鉻、銅、鐵、鎂、錳、鎳、磷、鉛、硒、硅、鋅/Al, B, Ca, Cr, Cu, Fe,γ-分泌
羅倫隱球酵母 鋁、、鋇、鈣、鉻、銅、鐵、、鋰、鎂、錳、鈉、磷、鈦/Al, B, Ba, Ca, Cr, Cu,髓過(guò)氧化物
氏解硫芽孢桿 鋁、砷、鉍、鎘、銅、鐵、鎂、錳、磷、鉛、銻、硅、錫、鋅/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe白介4
蟹味菇 鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm,緊密連接蛋白1
黃海黃色彎曲 鑭、鈰、鐠、釹、釤、銪、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥、釔/La, Ce, Pr, Nd, Sm,粘蛋白2
三方氏酵母 砷、鋇、鈷、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉛、錸、銻、硒、錫、碲、鋅/As, Ba, Co, Cr, Cu,緊密連接蛋白
蠟樣芽胞桿 (蠟狀芽胞桿) 砷、鋇、鈹、鈷、鉻、銅、鐵、錳、鎳、鉑、銻、硒、錫,碲、鋅/As, Ba, Be, Co, Cr,β-防御
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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