當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> NADPH氧化酶抑制劑(Apocynin)
貨號 | FS-X10587 |
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產(chǎn)品介紹:
Apocynin是NADPH氧化酶的選擇性抑制劑,IC50是10uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:498-02-2 別名:Acetovanillone 純度:99.86% 分子量:166.17 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Apocynin
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1g|5g
貨號:FS-X10587
實(shí)驗(yàn)報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
托魯斯山鏈霉菌磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1/5抗體Anti-PLK2 Antibody人抗單鏈DNA抗體(Anti-ssDNA)
深紅酵母磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體Anti-PLIN3 Antibody(PB1061)人抗存活抗體(Anti-Surv)
水單胞菌磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體Anti-PLIN2 Antibody(PB1083)人抗補(bǔ)體1q抗體(Anti-C1q)
環(huán)狀芽胞桿菌鞘激2抗體Anti-PLK1 Antibody(PB0529)人抗表皮基底膜抗體(Anti-EBMZ)
黑腐皮殼相關(guān)蛋白16抗體Anti-PLK2 Antibody人抗SSB/La抗體(Anti-La)
金霉鏈霉菌鞘激1抗體Anti-PLN Antibody人抗SSA/Ro抗體(Anti-Ro)
秦氏蜜環(huán)菌S100A13抗體Anti-PLN Antibody人抗Scl-70抗體(Anti-Scl70)
枯草芽孢桿菌CD2F-10抗體Anti-PLP1 Antibody人抗Sa抗體(Anti-Sa)
大腸埃希氏菌聯(lián)會復(fù)合體蛋白3抗體Anti-PLSCR1 Antibody人抗PL7抗體(Anti-PL7)
蘑菇輪枝孢S100鈣結(jié)合蛋白A10抗體Anti-PLSCR1 Antibody人抗PL12抗體(Anti-PL12)
熱帶假絲酵母磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體Anti-PLTP Antibody人抗P62抗體(AP62A)
枯草芽孢桿菌磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體Anti-Plzf/ZBTB16 Antibody人抗OJ抗體(Anti-OJ)
Bacillus aryabhattai Shivaji et al. 磷化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體Anti-PLXNA2 Antibody人抗Jo1抗體(Anti-Jo1)
短小芽孢桿菌磷化原癌基因蛋白18抗體Anti-PMEL Antibody人抗Ⅱ型膠原蛋白抗體(Anti-CⅡAb)
齒孢青霉磷化原癌基因蛋白18抗體Anti-PMEL Antibody卷曲域錨蛋白重復(fù)序列葡萄膜自身抗原(UACA)
豬瘟病RT-nPCR6-磷山梨脫氫抗體Anti-PMS2 Antibody卷曲同源物9(FZD9)
神經(jīng)細(xì)胞凋亡抑制蛋白抗體紫色桿菌屬小鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞提取物
SNF1/AMP激相關(guān)激2抗體蔬菜芽孢桿菌小鼠食管上皮細(xì)胞提取物
中心體相關(guān)蛋白激Nek2抗體水微菌屬小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞提取物
核蛋白易位啟動子區(qū)域TPR抗體腸桿菌屬小鼠小腸平滑肌細(xì)胞提取物
NADPH氧化酶抑制劑(Apocynin)筑波擬酵母 氟化鉺糖原合成
膠孢 氟化鐿3-磷甘油脫氫
弗雷德里克斯堡假單胞 氟化銩(III) 無水甘油-3-磷脫氫
微小鏈霉 氟化鈥(III)3-磷甘油脫氫
彩色豆馬勃 化銪(III) 六水合物解
擴(kuò)展青霉 1-苯甲酰哌磷油脫氫
巴斯德畢赤酵母 1-甲基-1H-咪唑-2-甲磷油脫氫
蘇云金芽孢桿庫爾斯塔克亞種 4-甲基-2-噻唑甲色P4501A1
斑污擬盤多孔孢 2-(叔丁基二甲基硅基)噻唑色P4502C9
灰平鏈霉 雙(二環(huán)己基膦)內(nèi)
釀酒酵母 BOC-O-叔丁基蘇3-羥基3-甲基戊二酰還原
淡紫擬青霉 叔丁氧羰?;〖拥鞍?/span>
費(fèi)比恩畢赤酵母 Pemetrexedα葡糖氧化
匍匐曲霉 四硫磺鈉,二水合物葡糖氧化
Rhodobacter vinaykumarii 2,6-二溴萘α-葡萄糖
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